[发明专利]一种简单高效的小麦中酚酸的高效液相色谱串联质谱检测方法

说明书

本发明公开一种简单高效的小麦中酚酸的高效液相色谱串联质谱检测方法，即将完全通过0.425mm孔筛的小麦样品充分溶解于2mol/L的氧化钠溶液中，避光条件下充氮水解后，采用乙酸乙酯萃取，取上层有机相旋转蒸干。残渣采用50%的甲醇重溶，过0.22μm滤膜后4℃保存待测；待测样品采用高效液相色谱串联质谱法进行检测，以酚酸标准品做标准曲线，检测结果代入标准曲线进行比对，获得小麦样品中酚酸的含量；该检测方法提取步骤简单、耗时短灵敏度高、稳定性好，适用于大批量定量检测小麦样品中酚酸的含量，能为农产品营养功能评估提供准确的分析方法。

技术领域

本发明涉及农产品营养功能检测技术领域，特别是一种简单高效的小麦中酚酸的高效液相色谱串联质谱检测方法。

背景技术

酚酸(phenolic acid)是指同一苯环上有若干个酚性羟基的一类化合物，本身具有较好的清除自由基的作用,因此是一类良好的天然抗氧化剂。小麦中含有多种具有抗氧化性的酚酸，主要有没食子酸、原儿茶酸、4-羟基苯甲酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸。这些具有天然抗氧化性的酚酸，已经引起人们的普遍关注。

酚酸所具有的保健功能经多位学者的研究主要表现在:清除体内自由基(心血管疾病等多种疾病的形成与多余的自由基的形成有关)、舒张血管、抗癌、抗病毒、抗菌消炎、抗过敏、产生癌细胞血管阻断素、刺激免疫系统产生抗体、抑制磷脂酶、脂肪氧化酶、环加氧酶、黄嘌呤氧化酶等酶的活性。

农产品营养功能评估是衡量一个国家农产品质量的重要指标。目前农产品中多种酚酸的检测还没有标准方法，少数酚酸的分析方法主要是高效液相色谱法，现有报道文献《Phenolic acid composition and antioxidant potential of insoluble andsolubledietary fibre extracts derived from select whole-grain cereals》中，对于酚酸的提取是将游离酚酸和结合酚酸分开提取，这种提取方法复杂，提取需要4小时，检测用高效液相色谱检测，检测时间长为70min；还有文献《超高效液相色谱-串联质谱法同时测定5个产地花椰菜和西兰花中的23种酚酸类化合物》中，对于酚酸的提取也是将游离酚酸和结合酚酸分开提取，总提取时间需要5个小时，目前采用超高效液相色谱-串联质谱检测，检出限为500μg/kg,对含量低的样品的检测有局限。

高效液相色谱串联质谱方法是一种集高效分离和多组分定性、定量于一体的方法，对热不稳定化合物如酚酸的分离和定量具有独特优势。但由于仪器精密，灵敏度高等特点，对样品的纯度要求较高。小麦样品蛋白质、淀粉含量比较高，如何让这些成分不会干扰酚酸的检测比较困难。

现有的液相色谱检测方法提取复杂耗时,检测时间长，灵敏度低，不能满足大批量样品的快速衡量检测的要求。蔬菜基质和小麦基质不同，两种基质中酚酸种类也有所差异，目前尚缺乏能同时对小麦中多种酚酸快速、灵敏的衡量检测分析方法。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种简单高效的小麦中酚酸的高效液相色谱串联质谱检测方法，即先对样品进行提取纯化，纯化液经高效液相色谱串联质谱技术(LC/MS/MS)检测，最后通过标准曲线定量测定样品中酚酸的含量，无需分开提取游离酚酸和结合酚酸，缩短检测时间。

本发明是这样实现的：

一种简单高效的小麦中酚酸的高效液相色谱串联质谱检测方法，具体步骤如下，

(1)样品提纯

准确称取2.00g小麦样品于250mL三角瓶中，按照质量体积比20:1(g/ml)量取40mL2mol/L的NaOH加入三角瓶中，快速充入氮气后迅速封上瓶口，25℃条件下避光振荡(2500rpm)水解2h，水解结束后调节水解液pH值在1.5-2.0之间。