[发明专利]人溶菌酶基因的合成及其表达产物的构建方法

说明书

本发明提供了一种人溶菌酶基因的合成及其表达产物的构建方法。所述人溶菌酶基因根据hLZ原基因序列和hLZ氨基酸序列，在不改变其氨基酸序列的前提下，将毕赤酵母稀有密码子优化成毕赤酵母常用密码子。通过优化人溶菌酶基因片段的密码子，使其在真核表达时能够得到产量高、纯度高的人溶菌酶重组蛋白。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域。

背景技术

人溶菌酶(human lysozyme，hLZ)属于溶菌酶家族的c型，由130个氨基酸组成的碱性多肽，分子量为14.7KDa，等电点为11。人溶菌酶基因位于12号染色体长臂上(12q15)，序列全长6807bp(GenBank序列号：X14008)，含有4个外显子和3个内含子。人溶菌酶是人体的一种非特异性免疫物质，广泛存在于人体体液中，如乳汁、泪液、唾液、鼻黏液、尿液、脑脊液、子宫颈黏液以及羊水等，同时也存在于呼吸道和肠道组织中。

人溶菌酶具有杀菌消炎作用，它水解细菌细胞壁肽聚糖N-乙酰葡萄糖胺(N-acetyl-D-glucosamine，NAG)与N-乙酰氨基葡萄糖乳酸(N-acetylmuramic acid，NAM)之间的β-1，4糖苷键，从而破坏细菌的细胞壁。溶菌酶还具有调节炎症反应的能力，它结合脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)和脂磷壁酸(Lipteihcoicacid，LTA)，防止其与肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells，IEC)和肠巨噬细胞上的受体相互作用；溶菌酶还对LPS具有螯合作用，抑制引发促炎症反应；溶菌酶对中性粒细胞也具有显著的免疫调节作用，减少对几种促炎症因子的产生，降低中性粒细胞中的氧化代谢但不抑制吞噬作用。因此，人溶菌酶可广泛应用于食品保鲜、婴幼儿奶粉、抗菌消炎药和抗生素替代等方面。

目前，人溶菌酶主要来源于人乳汁或人胎盘等，因原料来源受限及分离纯化成本较高，从而限制了其应用。国内虽有利用基因工程菌生产hLY的报道，但酶产量和活性均较低，质量不稳定。

发明内容

本发明旨在分析人溶菌酶基因序列，在不改变其氨基酸序列的前提下，将其中的密码子由毕赤酵母稀有密码子优化成毕赤酵母常用密码子，进而表达出产量高、纯度高的人溶菌酶。

本发明所采取的技术方案是：

一种人溶菌酶基因针对毕赤酵母优化表达的序列，其根据hLZ原基因序列：

AAGGTTTTCGAAAGGTGCGAATTGGCTAGAACTTTGAAGAGATTGGGAATGGACGGTTACAGAGGCATTTCTTTGGCAAATTGGATGTGCTTGGCTAAGTGGGAATCAGGTTACAACACTAGAGCTACTAATTATAACGCCGGCGATAGATCTACCGATTACGGCATTTTCCAGATCAACTCCAGATATTGGTGCAACGACGGTAAAACACCAGGAGCAGTTAACGCTTGTCATTTGTCTTGTTCCGCCTTGTTGCAAGATAATATTGCCGATGCAGTTGCTTGCGCTAAAAGAGTTGTTAGAGATCCACAAGGAATTAGAGCTTGGGTTGCTTGGAGAAATAGGTGCCAAAATAGAGACGTTAGACAATACGTTCAAGGTTGCGGAGTT(SEQ ID No.2)，

和hLZ氨基酸序列：

KVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNTRATNYNAGDRSTDYGIFQINSRYWCNDGKTPGAVNACHLSCSALLQDNIADAVACAKRVVRDPQGIRAWVAWRNRCQNRDVRQYVQGCGVHHHHHH(SEQ ID No.3)，