[发明专利]一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用

说明书

本发明公开了一株用于水果采后病害防治的抑菌谱广、效果稳定的喜仙人掌毕赤酵母Pichia cactophila菌株BY35及其使用方法。该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14909。该喜仙人掌毕赤酵母的使用方法：将菌株活化，用YPD发酵培养，离心，菌体用无菌水配成1×10⁸细胞/mL的菌悬液；将苹果、梨、葡萄或柑橘等水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，常温贮藏。该喜仙人掌毕赤酵母可同时控制苹果青霉病和灰霉病菌，梨果实青霉病和灰霉病菌，葡萄镰孢霉病和炭疽病，以及柑橘青霉病，减少采后病害造成的损失，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及水果采后病害生物防治领域，尤其涉及一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用，该菌株对苹果、梨、葡萄、柑橘的主要采后病害均具有显著的防治效果。

背景技术

新鲜水果产品的品质劣变受诸多因素的影响，但病害尤其是真菌性病害引起的腐烂变质是果实采后损失中最严重的因素。虽然水果采后病害可以通过农业防治、物理防治、化学防治和生物防治等很多途径进行防治，但目前控制水果采后病害的主要措施是化学防治(EckertOgawa，1985，1988)。但长期使用化学农药不但导致病原菌产生耐药性而降低杀菌效果(Prusky et al.，1985；as et al.，1991； HolmesEckert，1999)，而且频繁地使用高浓度的化学药剂也增加了果实上的农药残留量，严重威胁人们的健康，并造成环境污染(GullionKuijipers，1994)。因此，开发安全、高效、无毒、低抗性、无公害的控制果实采后病害新技术成为当前世界各国的研究重点(Falik et al.，1995；Tian et al.，2001；Kulakiotuetal.，2004)。其中利用生物拮抗菌防治果实采后病害是目前被证明安全有效的新方法 (WilsonWisniewski，1989；JanisiewiczKoersten，2002)。

迄今为止，各国科学家已经筛选出了许多对水果采后病原真菌具有明显抑菌效果的细菌、酵母菌和小型丝状真菌，其中利用拮抗酵母菌防治果实采后病害是当前已被证明的高效、低毒、低抗性的新技术(王友升，2012)。

然而，虽然目前国内外报道的拮抗酵母菌有近百种，但大多数拮抗酵母菌的生防效果仅在少数果实上得到验证。而由于同一酵母菌的不同菌株之间的生防效果有很大差异(Filonowet al.，1996)，因此，大多数拮抗酵母菌的缺乏抑菌谱广、效果稳定的菌株。

发明内容

针对上述技术难题，本发明的目的在于提供一株喜仙人掌毕赤酵母 (Pichiacactophila)BY35菌株在水果采后病害防治的应用，所述BY35 菌株从自然发酵的磨盘柿醪液中筛选分离获得，并在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，保藏菌株编号为CGMCC No.14909；按照以下步骤进行：将BY35菌株活化，用YPD液体培养基发酵培养，离心得到菌体，将菌体用无菌水配制成浓度为1×10⁸个/mL的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，密封后，放入常温贮藏。

优选地，所述水果为苹果、梨、葡萄和柑橘。

优选地，所述菌悬液的制备为：将菌株从-80℃冰箱取出，用YPDA 培养基活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min收集菌体，用无菌水洗3遍。

优选地，所述YPDA培养基是：酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖 20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min。

优选地，所述BY35菌株用于同时控制苹果青霉病和灰霉病菌，梨果实青霉病和灰霉病菌，葡萄镰孢霉病和炭疽病，以及柑橘青霉病。