[发明专利]一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法及其雄蜂蛹小分子抗氧化肽的应用

说明书

本发明提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，属于功能性食品技术领域，将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值后，与复合酶混合后酶解，复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；将酶解液离心分离、过滤，得到滤液，将滤液进行第一步超滤分离肽段；再进行第二步超滤脱盐；经减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。采用本发明的方法能够减少酶解液中苦味肽的形成，并且能够增加酶解液中的小分子肽的含量，得到的雄蜂蛹小分子抗氧化肽的分子量小于1ku，并且具有高活性的抗氧化性能。

技术领域

本发明涉及功能性食品技术领域，尤其涉及一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法及其雄蜂蛹小分子抗氧化肽的应用。

背景技术

雄蜂蛹是指蜂王在雄蜂房产的未受精卵，经工蜂孵化、发育、羽化的蛹体，其一般是指雄性蜜蜂发育到22～23日龄时的个体，此时的蛹已成熟，但尚未羽化，含有极其丰富的营养物质，是蜂王浆生产过程中的废弃物。我国蜂群每年可产生4000t以上的干雄蜂蛹。但长期以来，国内生产的蜂蛹制品主要为蜂蛹蛋白粉，只进行简单的加工，或将直接作为原料出口，产品的技术含量和附加值低，绝大多数蜂蛹的资源仍未得到有效的开发利用。

相关研究表明，蛋白质在人体消化系统中蛋白酶作用下的水解终产物大多为2～4个氨基酸残基组成的小肽，分子量为1ku以下。因小肽结构简单，分子量小，不饱和，所以能够通过细胞膜的渗透以原形直接进入细胞内，而不需要再次消化，也不需要耗费能量。因此小分子肽的吸收、转化和利用，都是高效、完全、彻底的。

中国发明专利CN 104886335 A公开了一种复合酶解雄蜂蛹的方案，该发明采用超临界技术将雄蜂蛹中脂肪脱除，再利用复合酶(中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、几丁质酶、酪蛋白酶抑制剂)酶解，酶解后用活性炭粗滤，再用0.2～0.8μm膜精滤，根据小分子肽水溶与否进行分离，得到两类不同的小分子肽。但是该方法制备到的肽仍为分子量很大的肽(分子量为几万甚至几十万)，并不是小分子肽。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，采用本发明的方法能够得到分子量小于1ku的小分子肽。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种雄蜂蛹小分子抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：

1)将雄蜂蛹粉与水混合、匀浆，调节匀浆液的pH值为6～7后，与复合酶混合，在50～60℃下酶解1～3h，得到酶解液，所述复合酶包括内切蛋白酶和外切蛋白酶；

2)将所述步骤1)得到的酶解液进行离心分离，将得到的上清液进行过滤，得到滤液，所述离心分离的速度为4000～5000rpm，所述过滤使用滤布进行，所述滤布的孔径为1～5μm；

3)将所述步骤2)得到的滤液进行第一步超滤分离肽段，得到肽段分子量＜1ku的超滤液，所述第一步超滤依次使用的超滤膜的截留分子量为10ku、 5ku、3ku和1ku；

4)将所述步骤3)得到的肽段分子量＜1ku的超滤液进行第二步超滤脱盐，得到截留液，所述第二步超滤使用的超滤膜的截留分子量为0.15～0.3ku；

5)将所述步骤4)得到的截留液减压浓缩后冷冻干燥，得到雄蜂蛹小分子抗氧化肽。

优选的，所述步骤1)复合酶的总酶活与雄蜂蛹粉的质量比为 (1000～2000)U:1g，所述内切蛋白酶和外切蛋白酶的酶活比为(1～3):(1～3)。

优选的，所述步骤1)内切蛋白酶包括碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或几种。

优选的，所述外切蛋白酶包括风味蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶中的一种或几种。

优选的，所述步骤1)雄蜂蛹粉的粒度为10～100μm。