[发明专利]HPLC检测山楂中齐墩果酸和熊果酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测山楂中齐墩果酸和熊果酸方法，尤其涉及一种HPLC检测山楂中齐墩果酸和熊果酸的方法。

背景技术

齐墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic acid)都是五环三萜类化合物，是多种中药材均含有的活性成分，具有保肝、消炎、抗肿瘤、调血脂、免疫双向调解等药理作用。其检测的方法有分光光度法、薄层扫描和高效液相色谱法，齐墩果酸和熊果酸互为同分异构体，仅29、30位的甲基位置不同，分离存在一定困难，要将两者分开，色谱条件的选择非常重要，近年来采用HPLC测定的方法大多流动相组成复杂，出峰时间长，峰形和分离度不太理想。

快速溶剂萃取(ASE)是指在密闭容器内于高温(50～200℃)和高压(3448～20685kPa)条件下，在短时间内，用有机溶剂提取固体或半固体样品的一种新型样品前处理方法。与超声、微波、回流、超临界萃取等成熟方法相比，ASE有萃取溶剂用量少、提取时间短、萃取效率高、操作简单方便、安全和自动化程度高等优点。国外已有学者将这项技术应用于植物药定量和定性分析中样品的前处理，但在中药材有效成分的定量和定性分析中作为样品的前处理方法应用较少。

山楂的主要成分为黄酮类及有机酸类化合物。黄酮类化合物主要有牡荆素(vitexin)、槲皮素(quercetin)、槲皮苷(quercitin)、金丝桃苷(hyperoside)、芦丁(rutoside)；有机酸主要有山楂酸(maslinic acid)、柠檬酸(citric acid)、齐墩果酸(oleanolic acid)，熊果酸(ur-solic acid)等。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种HPLC检测山楂中齐墩果酸和熊果酸的方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种HPLC检测山楂中齐墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步骤：

(1)制备对照品溶液：取齐墩果酸和熊果酸的对照品分别用甲醇制成对照品溶液；

(2)制备待测样品溶液：取山楂药材经快速溶剂萃取，获得的萃取液用甲醇稀释，得到待测样品溶液；

(3)制定标准曲线：取不同浓度的齐墩果酸和熊果酸的对照品溶液混合后上高效液相色谱仪进行定量测定，分别获得齐墩果酸和熊果酸的标准曲线；

(4)测定待测样品溶液：取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行定量测定，获得齐墩果酸和熊果酸的峰面积，然后根据齐墩果酸和熊果酸的标准曲线获得待测样品中齐墩果酸和熊果酸的含量。

所述步骤(3)和(4)中的色谱条件：150mm×2.1mm，3μm Thermo Acclaim C30色谱柱，进样量1μ量，以体积比为88∶12的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相，检测波长为205nm，柱温18℃，体积流量0.2mL/min。

所述步骤(1)中，分别精密称取齐墩果酸对照品54.2mg至50mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成质量浓度为1.084mg/mL对照品溶液；精密称取熊果酸对照品81.6mg至100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成质量浓度为0.8160mg/mL对照品溶液。

所述步骤(2)中，取山楂药材待测样品研成粉末，精密称取样品粉末0.5g，与1g硅藻土混合均匀后，置预先铺上纤维滤膜的5mL萃取池中，加入硅藻土以填满萃取池为宜，拧紧萃取池上盖，进行快速溶剂萃取，萃取溶剂为甲醇、萃取温度100℃、静态萃取时间6min、冲洗体积100％、静态萃取1次、吹扫时间为100s，萃取结束后，把萃取液转移至25mL量瓶中，用甲醇清洗萃取瓶3次并合并至容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得待测样品溶液。

所述步骤(4)中，不同浓度的齐墩果酸和熊果酸的对照品溶液按体积比为1:1进行混合。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1.本发明采用快速溶剂萃取法提取山楂药材，时间仅需10min，提取效率大为提高。

2.本发明使用150mm×2.1mm，3μm Thermo Acclaim C30色谱柱分析时间仅为88min，分析效率提高了至少4倍。

3.流动相使用0.2％醋酸作为流动相配制过程更简便。

具体实施方式

实施例1