[发明专利]一种抗蓝耳病Marc-145细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗蓝耳病Marc‑145细胞系及其制备方法和应用。所述抗蓝耳病毒Marc‑145细胞系是将Marc‑145细胞系的CD163胞外域SRCR5敲除所得到。本发明还提供了一对剪切Marc‑145细胞CD163受体SRCR5的gRNA，序列分别如SEQ ID NO.2～3所示。本发明将Marc‑145细胞表面CD163受体胞外第5个结构域SRCR5经CRISPR/CAS9基因编辑技术删除后，所得抗蓝耳病Marc‑145细胞系能够完全抵抗PRRSV感染，包括抗高致病性毒株HP‑PRRSV。而且，该抗蓝耳病Marc‑145细胞系表面CD163受体表达正常，其他生物学功能正常。本发明的抗蓝耳病Marc‑145细胞系对研究PRRSV致病机理及挖掘新型抗病或易感基因具有重要意义，为PRRSV研究提供了一个新的模型，对PRRSV抗性猪的筛选和培育具有重要的指导意义。

技术领域

本发明属于细胞基因工程技术领域。更具体地，涉及一种抗蓝耳病Marc-145细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)又称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive andrespiratory syndrome viruse，PRRSV)引起，PRRS主要引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔及各年龄阶段猪特别是仔猪呼吸道症状，特征性病变为间质性肺炎，死亡率极高，是一种高度接触性的全球性的重要传染病。该病最早于1987年在美国爆发，随后蔓延到欧洲，我国于1996年分离到该病毒。目前，根据基因组序列和抗原性差异，将PRRSV分为两种基因型，一种以Lelystad Virus(LV)毒株为代表的欧洲型，另一种以ATCC VR-2332毒株为代表的美洲型。在我国，PRRSV主要以美洲型为主，但据报道也分离到欧洲型毒株。2006年，我国爆发了猪高热病，对养猪业造成严重的经济损失，后来将此毒株定义为高致病型毒株(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome viruse，HP-PRRSV)，目前，高致病性蓝耳病(Highly pathogenic porcine reproductive andrespiratory syndrome，HP-PRRS)是对养猪业损害最大的疾病之一，由于该病毒具有免疫抑制性、抗体依赖增强性、持续性感染、病毒血症维持时间长等特点，目前尚没有很好的疫苗和药物可以防控蓝耳病。

PRRSV属于尼多病毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)成员，电镜下观察病毒粒子呈球形或椭圆形，有囊膜。病毒基因组为一条单股正链RNA，全长约为15Kb，含有5′和3′非编码区，中间为10个开放阅读框(openreading frame，ORF)，其中ORF2-7分别翻译病毒糖蛋白(glycoprotein GP)GP2a、GP2b、GP3、GP4、GP5、GP5a、M及N蛋白。其中最重要的是GP5和N蛋白，它们不仅是病毒粒子的主要组成部分，而且在病毒粒子的包装、成熟、免疫逃避及抗体诱导中产生重要的作用。