[发明专利]一种基于反应动力学的聚乙二醇洛塞那肽的制备方法

权利要求书

1.一种基于反应动力学的聚乙二醇洛塞那肽的制备方法，该方法包括以下步骤：

i)建立基于反应动力学的mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽过程优化控制技术，确定mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽的工艺参数；

ii)通过分析工艺的稳定性和最终产品质量对上述工艺参数进行微调，确定最佳的mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽工艺参数；

iii)修饰反应结束后得到聚乙二醇洛塞那肽粗品溶液；

任选的，还包括对聚乙二醇洛塞那肽粗品纯化的方法，包括：

采用阳离子交换层析纯化步骤iii)所得聚乙二醇洛塞那肽粗品溶液，得到聚乙二醇洛塞那肽盐溶液；再经RP-HPLC脱盐、减压浓缩、冻干得到聚乙二醇洛塞那肽。

2.根据权利要求1所述的基于反应动力学的聚乙二醇洛塞那肽的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇洛塞那肽是mPEG₂-MAL(40kD)修饰的洛塞那肽，其结构如式(1)所示：

其中所述mPEG₂-MAL(40kD)是分枝型聚乙二醇衍生物，分子量为40kDa，其中所述洛塞那肽的结构如式(2)所示：

3.根据权利要求1所述的基于反应动力学的聚乙二醇洛塞那肽的制备方法，其特征在于，步骤i)所述基于反应动力学的mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽过程优化控制技术包括以下步骤：

a)构建反应动力学模型如下：

上述2个反应可以用如下的微分方程组来描述：

其中，k₁为mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽的反应速率常数；De-PEG为失活形式的mPEG₂-MAL(40kD)，相应地，k_d为mPEG₂-MAL(40kD)的失活反应速率常数；C_loxenatide为洛塞那肽的浓度；C_PEG为可反应的mPEG₂-MAL(40kD)的浓度；C_De-PEG为失活形式的mPEG₂-MAL(40kD)浓度；t为反应时间；

b)通过不同反应条件下的组合实验，考察影响聚乙二醇修饰的关键因素，获得不同反应条件下mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽的反应底物和产物浓度随时间变化的实验数据用于动力学参数拟合；

c)基于步骤b)获得的实验数据，采用MATLAB软件拟合步骤a)建立的反应动力学模型，对相关的动力学参数k₁和k_d进行求解；

d)利用步骤a)建立的反应动力学模型和步骤c)获得的动力学参数k₁和k_d，逆向预测不同反应条件下mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽的反应过程；以获得最大的洛塞那肽和mPEG₂-MAL摩尔转化率以及缩短反应时间等为目标，确定优化的mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽工艺参数，并进行相应的实验验证。

4.根据权利要求3所述的基于反应动力学的聚乙二醇洛塞那肽的制备方法，其特征在于，考察影响聚乙二醇修饰的关键因素，包括不同pH、温度、聚乙二醇衍生物/洛塞那肽的摩尔比、反应时间等。

5.根据权利要求1所述的基于反应动力学的聚乙二醇洛塞那肽的制备方法，其特征在于，步骤ii)所述最佳的mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽工艺参数为：mPEG₂-MAL(40kD)修饰洛塞那肽的反应溶媒为0.1mol/L的磷酸钠盐缓冲液；磷酸钠盐缓冲液的pH为5.5-7.7，优选为7.0；反应温度为15-30℃；mPEG₂-MAL(40kD)/洛塞那肽摩尔比为0.92:1-1.38:1，优选为1.12:1-1.15:1；反应时间为15-90min，优选为15-60min。