[发明专利]一种用于检测LAG-3蛋白的电化学免疫传感器

权利要求书

1.一种用于检测LAG-3蛋白的复合物，其特征在于，由rGO-SnO₂与Ni-Co层状双氢氧化物中空纳米体通过Au-NH₂和Pt-NH₂键结合获得；所述复合物的制备方法如下：

1)将Co(NO₃)₂溶于CTAB水溶液中，得到混合液，再将2-甲基咪唑溶液加入该混合液中，固液分离，得到钴基沸石咪唑骨架纳米立方体；

2)将步骤1)制得的钴基沸石咪唑骨架纳米立方体溶于乙醇中，再加入含有Ni(NO₃)₂的乙醇溶液，反应结束后，固液分离，干燥，得到Ni-Co层状双氢氧化物中空纳米体；

3)将步骤2)制得的Ni-Co层状双氢氧化物中空纳米体分散于水中，加入NaBH₄乙醇溶液，反应结束后，滴加H₂PtCl₆乙醇溶液和HAuCl₄乙醇溶液，反应结束后，滴加NaBH₄乙醇溶液，反应结合后，固液分离，将固体干燥，得到产物；

4)rGO-SnO₂复合物分散于乙醇中，加入APTES，反应结束后，固液分离，干燥，将所得产物rGO-SnO₂-APTES分散于水中，制成水溶液，将该水溶液与步骤3)所得产物的水溶液混合，反应结束后，固液分离，得到所述用于检测LAG-3蛋白的复合物。

2.根据权利要求1所述的用于检测LAG-3蛋白的复合物，其特征在于：所述复合物的制备方法中，rGO-SnO₂复合物与Ni(NO₃)₂的质量比为2：1；

和/或，步骤3)中，H₂PtCl₆乙醇溶液的体积为5mL，其中H₂PtCl₆的浓度为0.5-1.5wt％；

和/或，步骤3)中，HAuCl₄乙醇溶液的体积为5mL，其中HAuCl₄的浓度为1wt％。

3.一种用于检测LAG-3蛋白的电化学免疫传感器，其特征在于：包括工作电极、参比电极和辅助电极，所述工作电极由基底电极修饰权利要求1所述的复合物获得。

4.根据权利要求3所述的电化学免疫传感器，其特征在于：所述基底电极上还修饰有链霉亲和素。

5.根据权利要求4所述的电化学免疫传感器，其特征在于：所述基底电极为玻碳电极。

6.根据权利要求3-5任意一项所述电化学免疫传感器中工作电极的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

a)将上述用于检测LAG-3蛋白的复合物滴加至基底电极基底电极表面，干燥，得到修饰电极，备用；

b)将链霉亲和素涂覆至步骤a)制得的修饰电极表面，通过Au-NH₂和Pt-NH₂键将链霉亲和素与AuPt合金结合，再将生物素修饰的抗体滴加至电极表面，反应结束后，采用BSA溶液封闭电极，得到所述工作电极。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤a)中，用于检测LAG-3蛋白的复合物浓度为1.0-3.0mg·mL^-1；

和/或，步骤b)中，链霉亲和素的浓度为0.1-0.5μg·mL^-1；

和/或，步骤b)中，生物素修饰的抗体浓度为1.0-3.0μg·mL^-1。

8.一种用于检测LAG-3蛋白的试剂盒，其特征在于：包括权利要求4或5所述电化学免疫传感器、L-半胱氨酸修饰的SiO₂、抗LAG-3、EDC/NHS溶液、牛血清白蛋白。