[发明专利]一种羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒

权利要求书

1.一种羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括细粒棘球绦虫重组抗原Eg95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；所述细粒棘球绦虫重组抗原是通过以下方法制备的：首先PCR扩增Eg95基因片段，并在Eg95基因的前后分别连接His标签序列和Myc标签序列，然后采用EcoR I和Xho I同时酶切PCR产物和真核表达载体pPIC9K，胶回收目的片段和载体后进行连接，构建重组质粒pPIC9K-(His-Eg95-Myc)，再将重组质粒转化到毕赤酵母GS115菌，经甲醇诱导表达，经Ni-NTA纯化。

2.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述细粒棘球绦虫重组抗原的包被方法为：将纯化的重组蛋白Eg95用包被缓冲液稀释至5μg/mL，包被酶标板，每孔加100μL，4℃过夜，用洗涤液洗涤3次，每次2min；然后加入含质量分数5％脱脂奶粉的PBS封闭液，每孔加200μL，37℃孵育2h，随后用洗涤缓冲液洗涤3次，每次2min，真空包装后置于4℃保存备用。

3.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液为含BSA和0.5‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，血清稀释度为1:100，血清反应条件为37℃下反应2h。

4.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照液为健康未免疫棘球蚴Eg95疫苗的羊血清，所述阳性对照液为含有Eg95抗体的羊血清。

5.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述酶标记结合物为辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG酶标抗体，所述酶标记结合物稀释度为1:7500，反应条件为37℃下反应30min。

6.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含质量分数0.5‰Tween-20的磷酸盐缓冲液。

7.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液的配方为：每500mL加乙二胺四乙酸二钠0.2g、柠檬酸0.95g、甘油50mL和TMB粉末0.15g。

8.如权利要求1或7所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液反应条件为37℃下反应10-15min。

9.如权利要求1所述的羊棘球蚴Eg95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。