[发明专利]作物幼嫩根系石蜡切片的制备方法

说明书

本发明提供了一种作物幼嫩根系石蜡切片的制备方法，其包括如下步骤：选材；微波固定；染色；微波脱水；微波透明；微波浸蜡；包埋；修块；粘固；切片、展片和烤片；脱蜡；封片和干固；其中，所述微波固定的步骤具体包括如下操作：将植物组织置于固定液中，在75℃下水浴的同时进行解冻档条件下的微波处理，3min后，更换至少两次固定液，每次更换后均在75℃下水浴的同时进行解冻档条件下的微波处理2min。本发明具有如下的有益效果：本发明实现了快速石蜡切片的制作。传统石蜡切片方法完整切片的制作需要约6～7天，而本发明所需时间为3天，在保证制片效果的基础上节约了时间。

技术领域

本发明涉及一种作物幼嫩根系石蜡切片的制备方法，属于植物样本组织石蜡切片技术领域。

背景技术

石蜡切片技术是显微技术上最重要、最常用的方法之一，起始于18世纪，1869年为Klebs所引用。此法是将材料包埋在石蜡中，然后连同石蜡在切片机上一同进行切片，所以称为石蜡切片法。最初的石蜡切片法，切片材料仅仅是为石蜡所包围，并非为石蜡所渗透。直到1882年Bourne发表一篇关于石蜡包埋技术的报告之后，石蜡包埋法才被广泛地采用，在植物细胞、组织研究史上发挥了重要作用，并且在今后仍将作为一项常规技术而发挥作用。

传统石蜡切片方法包括取材、固定(用时12～24h)、脱水(共9个步骤，耗时11h)、透明(共4个步骤，耗时4～16h)、浸蜡(16～24h)、包埋、修块、切片、展片、烤片、脱蜡(50min)、复水、染色、脱水、透明(共22个步骤，耗时3.5～14h)、封片、干固。传统石蜡切片法步骤繁琐，若中间有一步不慎出错都会影响制片效果；制片周期长，制片效率低。另外传统石蜡切片用二甲苯、丙酮等有机试剂较多，严重危害了制片者的身体健康。

近年来，关于石蜡切片制作方法的改进已有很多研究。周东华介绍了一种微波水浴辐射快速石蜡切片法，在术中病理诊断取得满意的效果。魏欣悦等人用微波快速石蜡切片法观察水稻叶片组织，结果表明该方法可以大幅缩短处理时间，提高工作效率。姜福建等人对植物组织石蜡切片包埋、修蜡过程进行改进，不仅提高了工作效率，而且修出的蜡块工整一致，同时对后面的切片过程无任何影响。但针对作物幼嫩根系快速石蜡切片法尚少。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种作物幼嫩根系石蜡切片的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种作物幼嫩根系石蜡切片的制备方法，其包括如下步骤：

选材；

微波固定；

染色；

微波脱水；

微波透明；

微波浸蜡；

包埋；

修块；

粘固；

切片、展片和烤片；

脱蜡；

封片和干固；

其中，所述微波固定的步骤具体包括如下操作：

将植物组织置于固定液中，在75℃下水浴的同时进行解冻档条件下的微波处理，3min后，更换至少两次固定液，每次更换后均在75℃下水浴的同时进行解冻档条件下的微波处理2min。

作为优选方案，所述染色的步骤具体包括如下操作：

用番红溶液染色后，分别依次用不同体积浓度的乙醇溶液进行脱色，再用固绿溶液复染。

作为优选方案，所述番红溶液的质量分数为1％，所述固绿溶液的质量分数为0.5％。