[发明专利]非共价键连接法半抗原---载体免疫原的制备

说明书

非共价键连接法半抗原‑‑‑载体免疫原的制备，属于免疫学检测技术领域。通过范德华力或分子间氢键连接制备非共价键连接法半抗原‑‑‑载体液相免疫原和非共价键连接法半抗原‑‑‑载体固相免疫原。具体方法是：①半抗原溶液与载体溶液混合或者将半抗原粉剂直接加到载体溶液或动物血清稀释液中，经搅拌、超声震荡、透析，制备非共价键连接半抗原‑‑‑载体液相免疫原，采用皮下注射免疫法免疫动物；②先用载体蛋白溶液包被膜片，再行半抗原溶液包被，或者用上述半抗原‑‑‑载体液相免疫原包被膜片，制备非共价键连接半抗原‑‑‑载体包被膜片固相免疫原，采用皮下包埋膜片免疫法免疫动物。

技术领域

本发明是对迄今通用的共价键偶联法半抗原-载体免疫原制备方法的改良，属于免疫学检测技术领域。

背景技术

半抗原的免疫分析法检测，应用领域十分广泛。如中药成分、农药残留、饲料激素或抗生素、血药浓度、过敏原、运动员兴奋剂等领域内的检测。然而，半抗原须与大分子载体连接成半抗原-载体复合物，才具免疫原性，才能诱生抗半抗原抗体。迄今制备半抗原-载体免疫原的通用方法，是采用化学偶联法制备共价键连接的半抗原-载体免疫原。这种共价键连接的半抗原-载体免疫原：①必然占用半抗原的活性基团，致使本来分子量较小、结构简单的半抗原结构发生改变，导致半抗原表位以半抗原残基而非半抗原固有结构的形式表达。②共价键连接的半抗原残基-偶联剂残基-载体残基，属于连接紧密的分子型复合物，它诱生的抗半抗原抗体，识别的多是半抗原残基-偶联剂残基-载体残基复合表位或半抗原残基表位，而非半抗原固有表位。这可能是导致抗半抗原抗体亲和力较弱、特异性较差、易发生交叉反应的重要原因之一。

发明内容

本发明的目的在于改革了迄今通用的共价键偶联法制备半抗原-载体免疫原，易导致抗半抗原抗体特异性较差、亲和力较低的弊端。建立非共价键连接法制备半抗原---载体免疫原的方法，可显著增强诱生抗半抗原抗体的亲和力和特异性，从而提高检测敏感性。

本发明的技术方案是：通过范德华力或分子间氢键制备非共价键连接的半抗原---载体免疫原。

一种通过范德华力或分子间氢键连接的非共价键连接法半抗原---载体免疫原。包括：通过范德华力或分子间氢键连接的非共价键连接法半抗原---载体液相免疫原和非共价键连接法半抗原---载体固相免疫原。

具体制备方法是：

非共价键连接法半抗原---载体液相免疫原的制备方法，包括以下步骤：将半抗原粉剂直接加到载体溶液中，或将半抗原溶液与载体溶液混合，经超声震荡或搅拌，透析即得。

非共价键连接法半抗原---载体固相免疫原的制备方法，包括以下步骤：先用载体溶液包被膜片，再直接加入半抗原溶液行半抗原溶液包被。或用上述本发明制备的非共价键连接的半抗原---载体液相免疫原直接包被膜片，即得。

本发明的半抗原为常规的半抗原，载体为常规的载体。本发明通过物质间范德华力或分子间氢键得到的非共价键连接半抗原---载体免疫原：①不改变相连物质的分子结构，可保留半抗原的固有构型；②非共价键的键长远远长于共价键，在半抗原与载体间保留了较长空间距离，可使半抗原表位能够相对独立表达。因此，采用非共价键连接法半抗原---载体免疫原，是提高抗半抗原抗体特异性、增强亲和力、增加半抗原检测敏感性的重要措施之一。

实验证实：非共价键连接法大黄素---BSA、共价键偶联法大黄素-BSA(重氮化偶联法大黄素-重氮盐-BSA)包被PVDF膜片免疫原，通过膜片皮下包埋免疫法免疫大鼠，诱生抗大黄素抗血清。本发明非共价键连接法抗血清与大黄素反应的抗原抗体结合价显著高于共价键偶联法。在特异性方面，本发明非共价键连接法抗血清与大黄素呈高价结合，与大黄酚呈低价结合，不与大黄素甲醚结合；而重氮化偶联法抗血清除与大黄素呈较高价结合外，也均与大黄酚和大黄素甲醚结合。即非共价键连接法半抗原---载体免疫原诱生抗体，对半抗原具有高度特异性和亲和力。