[发明专利]一种分离纯化烟草中赖百当二萜类成分的方法

说明书

本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及烟草中一类二萜类相关物质的提取、分离和纯化。该方法包括烟叶浸提、正相硅胶柱色谱分离、高效液相色谱分离等步骤。由于赖百当二萜类物质（包括Z‑abienol和13(E)‑labd‑13‑ene‑8α,15‑diol）主要存在于烟叶表面腺毛分泌物中，因而本申请中提取原料必须为新鲜烟叶才能确保较好提取效果。初步检测结果表明，利用本申请所述提取分离方法所制备赖百当二萜类物质的纯度大于98%，完全可以作为标准品用于相关物质分析研究中，同时由于相关分离纯化产品回收率较高，工艺操作较为成熟、简便，因而具有较好的推广应用价值，同时也可为烟草品质改善奠定良好的方法学基础。

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及烟草中一类二萜类相关物质的提取、分离和纯化。

背景技术

Z-abienol（Z-冷杉醇，分子式：C₂₀H₃₄O）和13(E)-labd-13-ene-8α,15-diol （赖百当-13-烯-8,15-二醇，分子式：C₂₀H₃₆O₂）是烟草中一类重要的二萜，具体化学结构分别如下：

。

这两种物质也是烟叶香气和香味成分的重要前体物。二者在调制过程发生降解，生成重要致香物质降龙涎香类成分，进而对烟叶品质及香气风格具有显著影响。同时，烟叶中的赖百当二萜类物质对防止烟草病虫害具有明显作用，是开展烟叶香型品质研究的关键化学物质之一。基于这些用途，分离并鉴定烟草中的赖百当二萜类成分，深入研究此类成分的降解产物、中间产物可以为进一步提高烟草质量、控制病虫害提供新的思路和技术手段。

一般而言，新鲜烟叶中含有丰富的Z-abienol和13(E)-labd-13-ene-8α,15-diol。针对这两种物质的分离提取，现有技术中也有部分报道，但总体而言，现有提取分离过程繁琐、化合物得率较低，不具有推广应用前景。 因而针对新鲜烟叶中的这两种物质的提取分离方法加以研究，可为烟草香气品质改善和烟支质量改良奠定良好的方法学基础。

发明内容

本发明主要目的是提供一种从新鲜烟叶中提取、分离和纯化关键致香前体物赖百当二萜类物质（包括Z-abienol和13(E)-labd-13-ene-8α,15-diol ）的方法。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一种分离纯化烟草中赖百当二萜类成分的方法，该方法的工艺流程如图1所示，具体包括如下步骤：

（1）烟叶浸提：以成熟期新鲜烟叶作为提取原料，将其干燥后粉碎（干燥时优选液氮速冻后低温（≤40℃）真空冷冻干燥），用有机溶剂进行浸提（具体例如18~25℃左右室温浸提12~48h），过滤、回收浸提液，将浸提液减压浓缩至无明显液体的膏状，称为烟草浸膏L1；

所述有机溶剂具体例如为二氯甲烷或三氯甲烷；所述烟草浸膏L1为棕褐色状；

所述新鲜烟叶可为任何产地、任何品种的香料烟、烤烟或白肋烟；

所述浸提，可辅助有回流提取、超声提取操作，以加强浸出效果；

（2）正相硅胶柱色谱分离：采用正相硅胶色谱柱对步骤（1）中所得烟草浸膏L1进行柱层析分离，所得洗脱流份即为赖百当二萜类物质（包括Z-abienol和13(E)-labd-13-ene-8α,15-diol ）；

具体柱层析分离时，所述正相硅胶柱色谱分离可以采用低压、中压制备色谱，以适当调整柱层析分离速度；