[发明专利]一种HIP/PAP蛋白的制备方法有效
| 申请号： | 201711355675.8 | 申请日： | 2017-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN107936111B | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 宋燕;许元生;陈伟柱 | 申请（专利权）人： | 广州安辰新药研究院有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/18;C12N15/12;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京中南长风知识产权代理事务所(普通合伙) 11674 | 代理人： | 郑海 |
| 地址： | 510630 广东省广州市黄*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 hip pap 蛋白 制备 方法 | ||
1.一种HIP/PAP蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设计目的蛋白的基因序列：根据HIP/PAP蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO：1和哺乳动物的密码子偏好，通过密码子优化得到编码HIP/PAP蛋白的核苷酸序列，并据此设计用于表达HIP/PAP蛋白的基因片段FHIP/PAP SEQ ID NO：2；
(2)合成用于表达HIP/PAP蛋白的基因片段FHIP/PAP；
(3)构建表达载体：将合成的用于表达HIP/PAP蛋白的基因片段FHIP/PAP利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后，插入同样双酶切的pTT5质粒，构建表达载体pTT5-HIP/PAP；
(4)转染：将表达载体pTT5-HIP/PAP转染哺乳动物细胞，获得培养上清；
(5)目的蛋白的纯化：离心后获得表达上清，采用离子交换色谱法进行纯化；
(6)目的蛋白的活性测定：采用试剂盒，检测目的蛋白的抗凋亡活性；
步骤(4)中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。
2.根据权利要求1的HIP/PAP蛋白的制备方法，其特征在于，所述CHO细胞是CHO 3E7细胞。
3.根据权利要求1所述的HIP/PAP蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述转染包括瞬时转染和稳定转染。
4.根据权利要求2所述的HIP/PAP蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述离子交换色谱法使用离子交换色谱层析Q Sepharose。
5.根据权利要求3所述的HIP/PAP蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述试剂盒是Caspase Glo 3/7试剂盒。
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