[发明专利]从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法和使用的试液

权利要求书

1.从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法，其包括如下步骤：

(1)将通过抽脂获取掺杂有膨胀液的脂肪样本于离心管中，500~1000rpm离心2~5min；

(2)移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀，备用；

(31)向步骤(2)所得脂肪颗粒中以体积比1：0.8~1.2加入消化酶混合液，在37℃以100rpm振荡消化20~40min；消化结束后，加入等体积的完全培养基终止消化，1000~2000rpm离心3~8min，弃上清，PBS重悬细胞沉淀；

(32)将步骤(2)所得底层细胞沉淀用PBS重悬，加入等量红细胞裂解液静置5~15min进行裂解；红细胞充分裂解后，1000~2000rpm离心3~8min，弃上清，PBS重悬细胞沉淀；

(4)合并步骤(31)和(32)所得细胞悬液，100μm滤网过滤，分离出作为原代的脂肪间充质干细胞；任选的对该脂肪间充质干细胞进行相关检测；

其中，

步骤(1)中，所述膨胀液包含：0.1mg/ml利多卡因和0.02ug/ml肾上腺素；

所述消化酶混合液组成为：0.05%胶原酶I型、0.05%胶原酶II型、0.03%中性蛋白酶、0.03%DNA酶、0.002%异丙醇。

2.根据权利要求1的方法，步骤(1)中，以800rpm离心3min。

3.根据权利要求1的方法，步骤(31)中，脂肪颗粒与消化酶混合液以体积比1：1的比例加入。

4.根据权利要求1的方法，步骤(31)中，在37℃以100rpm振荡消化30min。

5.根据权利要求1的方法，步骤(31)中，终止消化后，以1500rpm离心5min。

6.根据权利要求1的方法，步骤(32)中，加入等量红细胞裂解液静置10min进行裂解。

7.根据权利要求1的方法，步骤(32)中，红细胞充分裂解后，1500rpm离心5min。

8.根据权利要求1的方法，步骤(4)中，所述相关检测是指检测细胞形态以及免疫表型鉴定。

9.根据权利要求8的方法，所述免疫表型鉴定是指对CD73、CD90、CD105和CD19、CD11b、CD31、CD45、HLADR、CD34进行检测。