[发明专利]一种检测氨肽酶N活性的比色方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的检测氨肽酶N活性的比色方法，其特征在于：通过葫芦[8]脲识别结合多肽探针，以金纳米颗粒作为比色信号报告单元进行比色分析，进行氨肽酶N的活性检测；所述多肽探针的近氨基端含有苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸片段；所述多肽探针的近羧基端含有谷氨酸-亮氨酸-亮氨酸-半胱氨酸片段；

所述的非疾病诊断目的的检测氨肽酶N活性的比色方法，包括以下步骤：

（1）金纳米颗粒的合成；所述金纳米颗粒合成后加入阳离子盐溶液，所述阳离子盐溶液为25 µM的氯化钠溶液；

（2）多肽功能化金纳米颗粒的制备：多肽探针活化巯基后与金纳米颗粒混合制备得到多肽功能化金纳米颗粒；

（3）氨肽酶 N 活性的比色检测：向多肽功能化金纳米颗粒中加入氨肽酶 N后再加入葫芦[8]脲反应，所述葫芦[8]脲的浓度为100 μM，多肽功能化金纳米颗粒与葫芦[8]脲的反应时间为60分钟；

所述苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸片段可以与葫芦[8]脲以2:1的形式发生超分子组装；

当检测体系中存在活性的氨肽酶N时，氨肽酶 N 能够识别并切割多肽探针近氨基端的苯丙氨酸及甘氨酸，破坏与葫芦[8]脲的结合位点，葫芦[8]脲无法与多肽功能化金纳米颗粒发生相互作用，金纳米颗粒在检测体系中处于分散的状态；

当检测体系中不存在有活性的氨肽酶N时，葫芦[8]脲识别多肽功能化金纳米颗粒表面修饰的多肽探针的苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸片段，并进行组装，形成多肽功能化金纳米颗粒/葫芦[8]脲超分子组装体，金纳米颗粒之间的距离被拉近，在检测体系中处于聚集状态；

比色分析进行氨肽酶N的活性检测，所述比色分析为紫外-可见吸收光谱分析，波长为400-800 nm；

所述方法用于氨肽酶N活性检测的最低检测限为0 .096μg/mL。