[发明专利]一种快速检测肉鸡盲肠蛋白质水解细菌的方法

说明书

本发明涉及一种快速检测肉鸡盲肠蛋白质水解细菌的方法，包括如下步骤：步骤（1）、样品采集；步骤（2）、稀释样品；步骤（3）、洗脱细胞；步骤（4）、收集滤液；步骤（5）、收集沉淀物；步骤（6）、肉鸡盲肠蛋白质水解细菌的标定；步骤（7）、肉鸡盲肠蛋白质水解细菌的回位鉴定；步骤（8）、盲肠蛋白质水解细菌的丰度的确定及统计分析。本发明较大地降低了劳动强度，成本较低，操作过程简便，实验结果准确无误，能迅速提供给饲养人员相关的信息和数据，缩短筛选优质饲料配方的过程，能快速提供給饲养人员肉鸡盲肠蛋白质降解细菌的信息和数据，为确定特殊的饲料配方，在特殊的饲养条件下对肉鸡的生产性能和健康的影响程度。

技术领域

本发明涉及一种快速检测蛋白质水解细菌的方法，一种快速检测肉鸡盲肠蛋白质水解细菌的方法。

背景技术

肉鸡的肠道健康是肉鸡生长所必须的条件之一。肠道菌群的平衡对维持健康的肠道取着重要的功能。肠道内稳态紊乱会影响肠道功能和健康，导致生理失调，危害肉鸡健康并导致生长性能下降。对无菌肉鸡的研究显示，肠道微生物能够促进肠道成熟，提高机体免疫力，抑制病原菌，促进肉鸡生长，降解不易消化的食物，能够产生挥发性脂肪酸、维生素，因此肠道微生物在肠道发育及功能发挥方面具有重要的作用。

近年来，随着肉鸡饲养周期的逐年下降，目前肉鸡在5周内食用3.0公斤饲料后，鸡体重可达2.0公斤。快速增长的肉鸡生长速度与过去几十年来人们选择高转化率的饲粮蛋白质而导致的高采食量有关。在实际肉鸡的饲养过程中，饲粮配方中的高转化率蛋白质常常含有一定量未能消化的蛋白质，这部分蛋白质一旦进入肉鸡的盲肠，盲肠微生物菌群就利用它们作为降解的底物并产生能源来促进微生物菌群自身的增殖。近年来，由于需要向快速生长的肉鸡提供含有高转化率蛋白质的饲粮，因而导致了饲粮中未经消化的蛋白质流入盲肠进而发酵的数量增加，这部分蛋白质发酵的产物对肉鸡肠道健康的影响越来越受到关注。

在肉鸡的小肠和盲肠中，氨基酸和蛋白质的代谢机制是不同的。小肠中的微生物菌群与宿主竞争饲粮中的氨基酸，并吸收氨基酸合成自身新的细胞；盲肠微生物菌群则仅利用逃脱宿主消化的蛋白质和氨基酸。前期研究证明最优质的饲粮配方也不能保证所有的饲粮蛋白质都在小肠内被宿主吸收，总是有一部分蛋白质会逃脱宿主消化而流入盲肠，通过盲肠微生物进行分解发酵。一般来说，流入盲肠的蛋白质包括饲粮中的抗性蛋白质(不能被宿主蛋白酶或小肠细菌消化的蛋白质，其数量取决于饲粮蛋白质的原料或饲料加工质量)、微生物蛋白质(小肠乳酸杆菌和其他细菌竞争氨基酸，不可避免地吸收一些膳食氨基酸并利用它们进行合成代谢)和宿主合成和分泌的蛋白质(内源蛋白)。

现代肉鸡的饲养过程中，通过利用高转化率的饲粮蛋白质来提高肉鸡生长速度的同时，不仅要减少小肠微生物和宿主竞争营养物质，同时也要监控盲肠中的蛋白质的数量，以便及时调整饲粮的组成结构，降低因盲肠蛋白质代谢产生的有毒物质而导致宿主健康问题的风险。在饲粮蛋白质转化率较高的情况下，蛋白质容易消化，小肠中的微生物蛋白质保持最低量，用于防御的内源蛋白质的分泌物不应过高。一旦饲粮蛋白质脱离了宿主消化，并且不能用于宿主，未经消化的饲粮蛋白质进入盲肠，增加了蛋白质在盲肠的分解发酵水平，导致了盲肠蛋白质发酵产生的有毒代谢产物对肉鸡肠道后端的功能、肉鸡健康、肉鸡生产性能的负面影响。

由于饲粮是肠道微生物最重要的生长基质，饲粮的组成和消化率对肠道微生物群体有着重要影响。现代肉鸡的饲养不仅要求符合营养需要的饲粮配方，还要考虑利用饲粮配方的组成来调控微生物菌群的代谢活性对宿主健康和生产性能的影响。当饲粮中的淀粉和可发酵的碳水化合物有限或蛋白质丰富时，未经消化的饲粮蛋白质进入肉鸡盲肠通过盲肠中的致腐细菌进行发酵反应，盲肠蛋白质发酵产物除了包括对肉鸡生长有益的氨基酸、挥发性脂肪酸(VFA)和支链脂肪酸(BCFA)等产品之外，同时还产生许多有害和有毒的化合物，包括氨、生物胺、吲哚、酚、甲酚等。氨很容易被肉鸡从肠道吸收到血液中，对肠内细胞具有毒性作用；生物胺虽然参与到肠道细胞中的各种生理过程，但高浓度的生物胺会降低肉鸡的生长速度并增加肉鸡的死亡率，肉鸡盲肠蛋白质代谢的有毒产物最终降低了饲料转化率，对肉鸡的生长和性能产生不利影响。