[发明专利]一种用于特异性识别肿瘤细胞的多重作用印迹材料及其制备和应用

权利要求书

1.一种用于特异性识别肿瘤细胞的多重作用印迹材料，其特征在于：

其可按如下过程制备获得，以待特异性识别的肿瘤细胞为模板，将其附着或固定于基质材料表面，采用主要由中间是二硫键、一端能与肿瘤细胞结合的基团和另一端能参与材料聚合的基团组成的交联剂结合细胞，去除未结合的交联剂后，将交联剂和模板细胞形成的复合物置于预聚合体系中，通过引发预聚合体系聚合，去除多余的溶剂后，分离除去基质材料，再将交联剂中的二硫键还原成巯基以去除固化后聚合物表面的模板细胞，然后利用巯基和能与肿瘤细胞发生化学性特异性结合的经过修饰的核酸适配体、经过修饰的抗体、经过修饰的多肽或烯基苯硼酸类化合物中的一种或二种以上之间的反应，得到一种用于特异性识别肿瘤细胞的多重作用印迹材料；交联剂主要指由中间是二硫键、一端是能与肿瘤细胞结合的化学基团，另一端是能参与材料聚合的化学基团组成的分子；能与肿瘤细胞结合的化学基团主要由羧基、马来酰亚胺基团和琥珀酰亚胺基团中的一种组成；能参与材料聚合的化学基团主要由烯烃基、巯基、马来酰亚胺基团和琥珀酰亚胺基团中的一种组成；用于溶解或分散交联剂的溶剂包括水、磷酸盐缓冲液、氯化钠溶液、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺中的一种或二种以上；

由交联剂溶解于水、磷酸盐缓冲液、氯化钠溶液中的一种或二种以上中形成的溶液中，除水之外的其它溶质的总摩尔浓度范围为50 mM-200 mM；在水、磷酸盐缓冲液、氯化钠溶液中的一种或二种以上中不溶解的交联剂首先分散于水、磷酸盐缓冲液、氯化钠溶液中的一种或二种以上中，然后加入二甲基亚砜、二甲基甲酰胺中的一种或二种以上中溶解交联剂形成溶液，其中，二甲基亚砜、二甲基甲酰胺的体积浓度范围为0.5%-10%；

交联剂由下述分子中的一种或二种以上组成：

，其中，R₁为，，中的一种；R₂ 为 ，，，，，中的一种；R₃为H和中的一种；n为括号内烷烃基的长度，范围为2-6；m为括号内烷烃基的长度，范围为2-6。

2.如权利要求1 所述的多重作用印迹材料，其特征在于：

基质材料是指肿瘤细胞能够贴附的细胞培养板、细胞培养皿、细胞培养瓶、钛合金、钴基合金、不锈钢材料和聚赖氨酸修饰的玻璃材料的一种或二种以上。

3.如权利要求1 所述的多重作用印迹材料，其特征在于：

预聚合体系由能与交联剂共聚形成聚合物的单体组成的溶液，其中，预聚合体系中的单体主要由丙烯酰胺、N,N-二甲基丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、N-羟甲基丙烯酰胺和N-叔丁基丙烯酰胺中的一种或二种以上组成；用于溶解或分散单体的溶剂包括水、磷酸盐缓冲液、氯化钠溶液、葡萄糖溶液和乙醇中的一种或二种以上；由功能单体溶解或分散于溶剂中形成的溶液的质量浓度范围为10%-60%；

能引发预聚合体系固化的方法，包括光引发、热引发、电场处理和自由基引发中的一种或二种以上；将由能聚合的单体组成的预聚合体系加入到模板细胞表面引发聚合。

4.如权利要求1 所述的多重作用印迹材料，其特征在于：

还原二硫键的试剂为二硫苏糖醇溶液、巯基乙醇和三（2-羧乙基）膦溶液中的一种或二种以上。

5.如权利要求1 所述的多重作用印迹材料，其特征在于：

所述的能与肿瘤细胞发生化学性特异性结合的经过修饰的核酸适配体、经过修饰的抗体、经过修饰的多肽或烯基硼酸类化合物为，

经过修饰的核酸适配体是指以肿瘤细胞为目标，经过指数富集的配体系统进化技术筛选得到的寡核苷酸片段，该片段能够与肿瘤细胞特异性结合，然后在其末端修饰上马来酰亚胺和双键基团中的一种或二种以上；经过修饰的抗体是指能与肿瘤细胞表面抗原发生特异性结合的免疫蛋白，然后在免疫蛋白上修饰马来酰亚胺和双键基团中的一种或二种以上；经过修饰的多肽是指能与肿瘤细胞表面抗原发生特异性结合的蛋白结构与功能片段，然后对其修饰马来酰亚胺和双键基团中的一种或二种以上；烯基硼酸类化合物是指能与肿瘤细胞表面的多糖类化合物形成稳定复合物含有烯基的硼酸类物质；溶解经过修饰的核酸适配体、经过修饰的抗体、经过修饰的多肽或烯基硼酸类化合物的溶剂主要由水、磷酸盐缓冲液和氯化钠溶液中的一种或二种以上组成，形成的溶液的质量浓度范围为5%-95%。