[发明专利]一种负载紫杉醇的苦杏仁蛋白纳米载体及其制备方法

说明书

本发明提供了一种负载紫杉醇的苦杏仁蛋白纳米载体及其制备方法，该载体由苦杏仁蛋白单体通过热诱导形成。经过磷酸盐缓冲液抽提、离子交换色谱、凝胶过滤色谱分离，获得苦杏仁蛋白，序列为ARQSQLSPQNAYQLVQQQAR。该苦杏仁蛋白在Gly‑NaOH缓冲体系中，蛋白浓度为1 mg/mL，pH 9.0条件下，经过95℃加热10 min后形成蛋白质纳米载体，该载体稳定性好，体外实验显示载体对人正常肝细胞与犬肾细胞均无明显毒性。载体成功装载抗癌药物紫杉醇，获得92.18%的装载效率，且具备良好的缓释效果。本发明涉及的苦杏仁蛋白来源于食品，其载体的制备方法不涉及任何交联剂，安全性高。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域中的纳米载体制备，具体涉及一种用于负载紫杉醇的苦杏仁蛋白纳米载体及其制备方法。

背景技术

目前，许多药物的摄取途径依然是口服递送，特别是用于慢性疾病治疗的药物，然而，由于溶解性低、肠道吸收率低，以及药物在肠道中的不稳定性，导致很多药物呈现出利用率低的弊端，虽然，国内外研究已经设计了各类纳米载体实现药物的靶向递送，但其中大部分为合成型聚合物，如金属聚集体、无机颗粒、聚合物胶束等，此类载体在展现靶向性与穿透性优点的同时，也暴露出其在细胞毒性和可降解性方面的缺点，这给纳米载体的发展带来潜在的风险。

紫杉醇是一类具有抗肿瘤性的药物，1992年经美国FDA批准作为抗癌症药物上市，用于治疗非小细胞肿瘤的临床治疗。然而，紫杉醇的溶解度低，且对人体正常器官有严重的毒副作用，这些不利因素限制了紫杉醇的应用。

中药、食品热处理过程大分子物质形成纳米颗粒的体系提供了新的研究模型，包括“麻杏石甘汤”、“葛根芩连汤”、“茶汤”、“ 猪骨汤”在内的热提取液体系均存在纳米尺度的颗粒结构，该颗粒结构与蛋白质的自组装行为密切相关，“汤”在人类历史上饮用时间长、受众广，属于安全食品级材料（Generally Regarded as Safe，GRAS），由食品来源的蛋白质自组装形成的纳米颗粒可以解决现阶段对纳米载体安全性方面的担忧。

苦杏仁为家喻户晓的食物，有平喘镇咳、润肠通便、抗炎止痛、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老等功效，苦杏仁所含活性物质苦杏仁甙具有很强的抑菌作用。苦杏仁作为单方或复方的药材炮制成汤剂服用，炮制过程发生了蛋白质自组装、纳米颗粒形成的化学变化，而蛋白质纳米颗粒具有装载难溶性药物的优势，经纳米载体装载的非水溶性抗癌药物，可以降低抗癌药物的毒副作用，提高生物利用率。目前，对苦杏仁蛋白及其纳米载体应用的研究国内外尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于苦杏仁蛋白纳米结构装载紫杉醇或类似非水溶性药物的天然载体及其制备方法。该载体安全性高、装载效率高、缓释效果明显。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种苦杏仁蛋白，氨基酸序列为ARQSQLSPQNAYQLVQQQAR。

所述蛋白的制备方法为经过磷酸盐缓冲液水相抽提，离子交换色谱Macro-PrepHigh-Q，凝胶过滤色谱TSK-GEL G6000 PW，从苦杏仁饮片中分离得到一个电泳纯的蛋白。

苦杏仁蛋白粗提液制备：苦杏仁饮片经高速粉碎机粉碎，经丙酮（1:10 w/v）脱脂后，以质量比1:20将脱脂粉末与去离子水混合，置于室温搅拌1 h，混合液经6000 g离心10min后，收集上清液，沉淀重悬后再次重复提取步骤。将两次上清液混合，经0.45 μm水系滤膜抽滤，滤过液即为苦杏仁蛋白粗提液。