[发明专利]一种组织型纤溶酶原激活剂突变体及其应用

说明书

本发明提供一种组织型纤溶酶原激活剂突变体及其应用，该突变体包括A146位点是一个全新的突变位点，包括A146在内至少一个及以上氨基酸残基的取代、缺失或添加。本发明突变体，具有显著抵抗被其内源性抑制剂（PAI‑1）抑制的能力和增强的激活纤溶酶原的能力。可以应用于制备治疗血栓性疾病的药物，包括急性心肌梗塞、急性肺栓塞、脑卒中、及静脉血栓等疾病。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种组织型纤溶酶原激活剂突变体及其应用。

背景技术

随着社会和经济的迅速发展，人民生活质量的日益提高。其中，高糖、高蛋白和高脂肪食物在人们日常营养摄入中所占比例越来越高，从而导致高血压、高血脂、冠心病、心肌梗塞、脑梗塞等疾病形成，对整个人类的健康造成了巨大威胁。目前，心血管疾病，已经成为威胁人类健康的第一大杀手，尤其是血栓栓塞性疾病。其主要包括三类：(1) 冠状动脉形成血栓，主要指急性心肌梗死 (AMI); (2) 脑血管形成血栓，即急性缺血性卒中；(3) 静脉形成血栓，例如急性肺栓塞。根据统计，在美国每年大约有900,000人患有AMI，其中死亡人数多达225，000人，由于发病到死亡的时间特别快，其中大约有125，000人在未得到及时治疗便已经死亡。在我国，据统计每年有300万人需要溶栓药物治疗。而且，大多数的急性心肌梗死是由冠状动脉的闭合栓塞引起血流不足及心肌死亡而导致的。溶栓治疗是血栓性疾病治疗的重要手段，溶栓药物是通过溶解血栓、增加心肌血流、改善供氧使梗死范围缩小、改善缺血区的脑神经细胞损伤，从而使的临床治疗得到很大幅度的提高。 国际多个大型临床实验证实，溶栓治疗可以降低AMI病死率30%以上。

组织型纤溶酶原激活剂 (tissue plasminogen activitor，tPA) 是血液中纤溶系统的生理性激活剂。由于tPA与血栓基质纤维蛋白具有较强的特异性亲和力，能在血栓局部有效的激活纤溶酶原为纤溶酶而使血栓溶解。tPA与链激酶、尿激酶等溶栓剂比较具有作用快、不造成全身性纤维蛋白溶解、治疗高等优点。天然tPA由527个氨基酸组成，其中包含五个结构域分别是：1、指型区（F区，4-49位氨基酸）与纤维蛋白结合相关。2、表皮生长因子区（E区，50-86位氨基酸）与细胞膜受体结合有关。3、kringle 1(K1区, 87-175氨基酸)为肝脏受体结合部位。4、kringle 2(K2区, 176-261氨基酸)含有纤维蛋白结合位点。5、水解酶结构域区（SPD区，262-527氨基酸）催化纤溶酶原转化成纤溶酶，并且是PAI-1的结合位点。

组织型纤溶酶原激活剂 (tPA) 是美国FDA在1987年批准作为治疗急性心肌梗塞的第一个基因工程重组的溶栓药物。1990年美国FDA又批准其用于治疗急性肺栓塞。1999年美国FDA再次批准其用于治疗急性缺血性卒中。并且是急性缺血性卒中目前唯一的溶栓治疗药物。

但是，tPA在临床上的应用也表现出一定的局限性。其中主要是在病灶部位富集了大量的纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI-1),从而导致治疗性药物tPA很容易被PAI-1不可逆性抑制，迅速使其失去活性。在临床上，为了保证治疗效果，通常采用给病人注入高达100mg/50kg剂量。高剂量的tPA不仅会引起致命的颅内出血风险，而且会导致神经毒性副作用，从而提高了病人的死亡率。另外，在形成血栓过程中，大量的血小板被包含在血栓中。在伴随着凝血酶的刺激下，血小板不断被激活，释放出大量的PAI-1，同时也会导致血液中tPA药物的效价大大降低。虽然目前开发了一款具有抵抗PAI-1能力的TNK-tPA突变体. 但是TNK-tPA突变体所包含的KHRR^296-299突变为AAAA对PAI-1的抵抗能力还不够,并且没有表现出增强对纤溶酶原激活能力。因此，在临床上，仍然有巨大的需求去开发新的tPA类药物，可以用于治疗急性心肌梗塞、脑血栓、肺栓塞等疾病，在医学上进一步去提高其应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组织型纤溶酶原激活剂突变体及其应用，具有显著抵抗被其内源性抑制剂（PAI-1）抑制的能力和增强的激活纤溶酶原的能力。