[发明专利]一种表型高度一致的恶性淋巴瘤模型的建立方法及其用途

说明书

本发明提供了基于C57BL/6小鼠遗传背景的遗传修饰小鼠和遗传修饰小鼠细胞系，所述遗传修饰是使野生型C57BL/6小鼠的基因组的一种或者多种肿瘤抑制基因(例如p53基因)的表达降低或者不表达，从而获得的遗传修饰小鼠对淋巴瘤易感，能够用作小鼠淋巴瘤模型。本发明也提供了制备所述C57BL/6遗传修饰小鼠的方法。本发明还提供了所述C57BL/6遗传修饰小鼠的用途，用于筛查诱导淋巴瘤的化合物、筛选治疗淋巴瘤的化合物、筛选肿瘤标志物、筛选肿瘤发生的早期驱动物。

技术领域：

本发明涉及利用遗传修饰的小鼠构建恶性淋巴瘤模型的方法和其用途。具体地，本发明通过对C57BL/6小鼠遗传背景进行基因组DNA的遗传修饰，获得了基于C57BL/6小鼠遗传背景的遗传修饰小鼠和遗传修饰小鼠细胞系。进而获得能稳定传代的纯合子和杂合子p53基因敲除小鼠。该小鼠自发或者诱发均能获得外显率高、表型一致的恶性淋巴瘤模型。本发明制备的淋巴瘤模型能够用于筛查诱导淋巴瘤的化合物、用于筛选治疗淋巴瘤的化合物、用于筛选肿瘤标志物、用于筛选肿瘤发生的早期驱动物等。

背景技术

淋巴瘤是原发于淋巴结或淋巴组织的一种常见肿瘤。虽然患有难治性淋巴瘤或者淋巴瘤复发的患者的预后由于对淋巴瘤的深入研究和新疗法的出现导致了患者显著改善的生活质量，但是患者的总体治疗效果仍然不容乐观。建立能够模拟人类淋巴瘤临床特征的的合适动物模型对于促进人们了解淋巴瘤的发病机理以及开发抗淋巴瘤药物和合理治疗淋巴瘤、药物致癌性研究等是至关重要的。

现有技术中已经报道了多种淋巴瘤的动物模型。例如，Calman K.C.报导了将可移植的加德纳淋巴肉瘤细胞悬液注射入CBA小鼠的胃或小肠中，分别在65％或34％的小鼠中建立了加德纳淋巴肉瘤模型(参见Calman K.C.,Why are small bowel tumours rare？Anexperimental model,Gut.1974；15(7):552-554)；Nakamura D报导了将分离自成年T细胞白血病/淋巴瘤(Adult T-cell leukemia/lymphoma(ATL))患者的外周血单个核细胞异种移植入NOJ小鼠产生了ATL小鼠模型(参见Nakamura D等人，A new ATL xenograft modeland evaluation of pyrrolidine dithiocarbamate as a potential ATL therapeuticagent.Exp Hematol.2015；43(11):944-950)。

但是，这些通过异种移植淋巴瘤细胞获得的模型小鼠寿命短，且无法用于淋巴瘤的发病机理研究等，因此，本领域还尝试了通过转入致癌基因或者敲除抑癌基因来构建遗传修饰小鼠，期望获得高发病率的、高表型一致的小鼠淋巴瘤模型。到目前为止，本领域尚未获得具有足够高发病率的、高表型一致的遗传修饰小鼠淋巴瘤模型。

发明概述

本发明提供了具有足够高发病率的、高表型一致的遗传修饰C57BL/6小鼠淋巴瘤模型、其制备方法、以及所述遗传修饰C57BL/6小鼠淋巴瘤模型的医药用途。

本发明的第一方面涉及一种基于C57BL/6小鼠遗传背景制备遗传修饰的C57BL/6小鼠的方法，包括：

(a)提供C57BL/6小鼠胚胎干细胞(其缩写为“ES细胞”)的群体，所述C57BL/6小鼠ES细胞的群体是雄性XY C57BL/6小鼠ES细胞的群体和/或是雌性XX C57BL/6小鼠ES细胞的群体；

(b)对所述C57BL/6小鼠ES细胞的群体进行靶向的遗传修饰，使得其基因组在一种或者多种肿瘤抑制基因中包含导致所述肿瘤抑制基因被异常表达的遗传修饰，其中所述异常表达是降低的表达或者不表达，优选地，所述肿瘤抑制基因是p53基因，所述靶向的遗传修饰包括对肿瘤抑制基因的缺失、敲除、插入、点突变或它们的组合；

(c)鉴定包含靶向的遗传修饰的C57BL/6小鼠ES细胞克隆；