[发明专利]一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β‑谷甾醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物甾醇的分离技术领域，具体涉及一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法。

背景技术

植物甾醇是一种以环戊烷全氢菲为基本骨架的天然活性化合物，C-3位上连有羟基，C-17位上连有8～10个碳原子构成侧链的甾族化合物，属于脂质中的不皂化物，其中菜油甾醇(Campesterol)、豆甾醇(Stigmasterol)和β-谷甾醇(Sitosterol)是植物甾醇中含量最高的甾醇单体，其结构同时见图1。植物甾醇具有降低胆固醇和心血管疾病风险、抗癌、抗炎和抗氧化等生理功能，在医药、食品、化妆品等领域越来越受到重视，截止2015年全球甾醇的需求量高达1.8万吨左右。目前，植物甾醇主要从植物油脱臭馏出物和妥尔油中分离纯化获得。因此，建立一种灵敏准确、快捷简便的检测方法，以此测定植物甾醇的含量对分析此类活性物质具有重要意义。

由于菜油甾醇和豆甾醇仅在C-22位和C-24位上存在结构差异，两者之间产生的极性中和效应会使菜油甾醇和豆甾醇在色谱分离过程中出现共洗脱现象，目前国内外研究大多针对其中的一种或两种甾醇进行同时分离测定，未见对三种甾醇同时进行分离测定研究。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的技术空白，提出了本发明。

因此，本发明的目的是解决现有技术中的不足，提供一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，包括，标准溶液的配制，采用极性溶剂配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合标准储备液，经处理后，再用极性溶剂分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液；色谱条件，色谱柱为C18色谱柱，检测波长为200～220nm，柱温为25～45℃，流速为0.5～1.5mL/min。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述采用极性溶剂配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合标准储备液，其中，所述极性溶剂包括甲醇。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述经处理后，其是用氮吹仪将所述混合标准储备液中的甲醇吹干。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述再用极性溶剂分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液，其中，所述极性溶剂包括乙腈。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液，其是，配制含菜油甾醇2.5、5、10、20、40、50μg/mL的混合标准系列溶液，配制含豆甾醇5、10、20、40、80、100μg/mL的混合标准系列溶液，配制含β-谷甾醇5、10、20、40、80、100μg/mL的混合标准系列溶液。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述色谱条件，其中，流动相包括100％乙腈、100％甲醇、乙腈:水＝85:5～99:1(v/v)或甲醇:水＝85:5～99:1(v/v)。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述色谱条件，其中，流动相包括100％乙腈或乙腈:水＝85:5～99:1(v/v)。

作为本发明所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一种优选方案，其中：所述色谱条件，其中，进样量为10～60μL。

本发明所具有的有益效果：

我方发明，不仅使3种甾醇单体达到基线分离，大大缩短了保留时间，最终确定了最优的色谱条件为1.0mL/min，检测波长208nm，柱温35℃，且该方法精密度和加样回收率均较高，能够满足准确定量3种甾醇单体含量的检测要求。

附图说明