[发明专利]一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法与应用，所述病毒的胸腺嘧啶核苷激酶(TK)区包含SEQ ID NO.1所示的PD1全长抗体的编码序列。本发明将基因治疗的抑瘤效果与病毒治疗的溶瘤效应有效结合起来，制备了一种可高效表达PD1全长抗体基因的溶瘤痘苗病毒。在溶瘤病毒发挥溶瘤效应裂解肿瘤细胞的同时，大量表达PD1全长抗体，抑制T细胞表面PD1的活性，激活T细胞免疫应答，发挥双重的抗肿瘤效果。相对于单纯的基因疗法或者病毒疗法增强了其对恶性B细胞淋巴肿瘤的杀伤能力。采用病毒复制相关基因缺失的方式，缺失痘苗病毒基因组的TK区，确保病毒在异常增殖的肿瘤细胞内特异性复制，而在正常的细胞中则不能复制，大大增强了溶瘤痘苗病毒载体的安全性。

技术领域

本发明属于基因工程学，免疫学和肿瘤学，涉及一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法与应用。

背景技术

恶性淋巴瘤的发病率占整个癌症患者的3-5％，每年有452,000新增患者。大于90％的成人患者来源于成熟的B细胞，提示B细胞淋巴肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一。

免疫治疗是继手术，放疗，化疗，分子靶向治疗后又一种癌症治疗新方法。在各种癌症免疫治疗方法中，免疫检查点抑制剂是近年来获得突出疗效的药物之一。免疫检查点是预防免疫系统过度激活的抑制性通路，在被激活的免疫细胞表面存在一些蛋白如CTLA4，PD1等在过度免疫反应时起到“刹车”作用，然而在肿瘤发生时，这些蛋白因过度表达而持久地为免疫系统发出抑制信号，从而促进肿瘤的免疫逃逸。故免疫检查点抑制剂在癌症的免疫治疗中起着重要的作用。

PD-1/PD-L1信号通路是阻断免疫检查点策略的最为重要的靶点之一。在肿瘤发生时可导致T细胞表达PD1，多种类型癌症的肿瘤侵润淋巴细胞(TIL)也表达PD-1。同时研究表明多种癌细胞高表达PD-L1，包括淋巴瘤，白血病，恶性黑色素瘤和非小细胞肺癌(NSCLC)等。PD-1与癌细胞表面的PD-1配体(PD-L1或者PD-L2)结合抑制T细胞的活化，导致特异性T细胞耗竭或失能。

在B细胞淋巴肿瘤上，研究显示滤泡淋巴瘤(FL)的TIL和外周血T细胞上高表达PD1，且T细胞失能。另一方面，多种B细胞肿瘤，包括弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)，原发纵膈大B淋巴瘤(PMBCL)以及睾丸大B淋巴瘤上均大量表达PD-L1。因此，有效地阻断PD-1/PD-L1信号通路，能够增强T细胞对B细胞淋巴肿瘤的杀伤。

新近，阻断免疫检查点的PD-1和PD-L1单抗和抑制剂已应用于I-III期临床研究。2015年6月，美国食品及药物管理局(FDA)批准PD-1单抗nivolumab作为一款治疗药物用于先前经过化疗的晚期NSCLC患者。I期临床研究表明，nivolumab治疗NSCLC患者的平均总生存期为14.9个月，1年和3年的生存率为42％和18％。

但是，免疫检查点抑制剂也有其局限性：(1)多数病人不能获得持久的完全反应；(2)PD-1单抗治疗后约25-30％患者出现严重免疫相关副作用(irAEs)；(3)PD-1/PD-L1通路在肿瘤微环境中的特点影响了PD-1单抗的疗效。联合治疗是克服免疫检查点抑制剂局限性的主要研究方向。目前正在研究的策略包括抗PD-1单抗与放化疗、小分子靶向药物、其他免疫检查点抑制剂或溶瘤病毒联合。