[发明专利]颠茄WRKY类转录因子基因及其重组植物表达载体和应用在审
| 申请号： | 201711310317.5 | 申请日： | 2017-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN107937414A | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 廖志华;陈敏;杨春贤;邱飞;强玮 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C07K14/415;C12N15/82;A01H5/06;A01H6/82 |
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| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 颠茄 wrky 转录 因子 基因 及其 重组 植物 表达 载体 应用 | ||
1.颠茄WRKY类转录因子基因，其特征在于：所述颠茄WRKY类转录因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述颠茄WRKY类转录因子基因，其特征在于：所述颠茄WRKY类转录因子基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.含有权利要求1所述颠茄WRKY类转录因子基因的重组植物表达载体，其特征在于：所述重组植物表达载体由 SEQ ID NO.3所示核苷酸序列连入pBI121载体的BamH1和Sac1酶切位点处制得。
4.权利要求1～2任一项所述颠茄WRKY类转录因子基因或权利要求3所述重 组植物表达载体在提高颠茄生物碱含量中的应用，其特征在于：所述生物碱为东莨菪碱。
5.一种提高颠茄生物碱含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：通过在颠茄中过量表达颠茄WRKY类转录因子基因，所述颠茄WRKY类转录因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述生物碱为东莨菪碱。
6.根据权利要求5所述提高颠茄生物碱含量的方法，其特征在于，在颠茄中过量表达颠茄WRKY类转录因子基因的方法如下：克隆颠茄WRKY类转录因子基因，然后构建植物表达载体，获得含有颠茄WRKY类转录因子基因的重组植物表达载体，再将获得的重组植物表达载体转化发根农杆菌获得工程菌，最后用工程菌转化颠茄，筛选颠茄毛状发根，扩大培养，PCR筛选阳性植株，获得生物碱含量提高的颠茄毛状发根。
7.根据权利要求6所述提高颠茄生物碱含量的方法，其特征在于，克隆颠茄WRKY类转录因子基因的方法为：以颠茄cDNA为模板，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物进行PCR扩增，电泳检测，回收，获得颠茄WRKY类转录因子基因。
8.根据权利要求6所述提高颠茄生物碱含量的方法，其特征在于，所述重组植物表达载体为将SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列连入pBI121载体BamH1和Sac1酶切位点处而得。
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