[发明专利]一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液，其包含以质量分数计的以下组分：75～95％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～8％的牛血清白蛋白(BSA)、0.01～0.5％的硫柳汞钠、0.05～5％的抗凝剂、0.1～15％的非常规性饲养动物血清以及0.05～2％的青链霉素双抗。本发明还公开了抗体稀释液的制备方法和应用。本发明可以降低普通酶联免疫检测方法的结果背景、提高酶联免疫检测的灵敏度和稳定性。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂技术领域，更具体地说，涉及一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液及其制备方法和应用。

背景技术

酶联免疫检测试剂盒(ELISA试剂盒)是酶免疫测定技术中应用最广的检测技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。酶联免疫检测试剂盒通常包括包被液、洗涤液、抗体稀释液、终止液等在检测过程中所使用的试剂。

研究表明，抗体稀释液的配方对ELISA方法的检测背景及试剂盒的稳定性起关键作用。在定性ELISA检测中，影响检测灵敏度的最主要因素是信噪比，即方法中阳性对照与阴性对照的比值。为了提高灵敏度，可以通过增强抗原与抗体结合能力，对信号进行放大，对背景(噪音)进行降低等方法。但由于抗体与抗原结合的能力往往在抗体生产出来后就已经确定，所以提高灵敏度的主要手段是放大信号以及降低背景。

现有酶联免疫检测方法中存在检测背景偏高，试剂盒质控样本稳定性欠佳以及建立检测方法的敏感性过低等问题。要解决这些问题，可以一方面从抗原抗体的制备角度入手，另一方面就是研发一种可降低检测方法信噪比的抗体稀释液入手。目前常用的抗体稀释剂中为抗体提供营养的成分多采用胎牛血清。由于抗体稀释液常用于猪、鸡、鼠、牛等相关抗原、抗体或细胞因子等的检测试剂盒中，猪、鸡、牛、兔的饲料中经常含有动物源性蛋白，而他们的饲养环境也容易出现交叉，若采用含有上述动物来源血清的抗体稀释液容易增加检测方法的交叉反应。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液，以降低普通酶联免疫检测方法的结果背景、提高酶联免疫检测的灵敏度和稳定性。

本发明的另一目的在于提供一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液的制备方法，通过该方法获得一种可以降低普通酶联免疫检测方法的结果背景、提高酶联免疫检测的灵敏度和稳定性酶联免疫检测试剂盒的抗体稀释液。

本发明的第三个目的在提供一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液在酶联免疫检测试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种用于酶联免疫检测的抗体稀释液，其包含以质量分数计的以下组分：75～95％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～8％的牛血清白蛋白(BSA)、0.01～0.5％的硫柳汞钠、0.05～5％的肝素或乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)中的一种、0.1～15％的非常规性饲养动物血清以及0.05～2％的青链霉素双抗。

作为进一步的方案，本发明所述的用于酶联免疫检测的抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：85～92％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～5％的牛血清白蛋白(BSA)、0.1～0.3％的硫柳汞钠、0.1～2％的抗凝剂、3～8％的非常规性饲养动物血清以及0.1～1％的青链霉素双抗。

作为进一步的方案，本发明所述的用于酶联免疫检测的抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：91％作为溶剂体系的pH7.2的1×PBS缓冲液、2.0％的牛血清白蛋白(BSA)、0.2％的硫柳汞钠、1.0％的抗凝剂、5.0％的非常规性饲养动物血清以及0.8％的青链霉素双抗。

作为进一步的方案，本发明所述的抗凝剂为肝素或乙二胺四乙酸二钠；所述非常规性饲养动物血清为骆驼、驼鹿、羊驼、马、鸵鸟、鸽、牦牛等动物血清中的一种或两种混合。