[发明专利]一种葎草花粉致敏的小鼠哮喘模型的构建方法

说明书

本发明提供一种葎草花粉致敏的小鼠哮喘模型的构建方法。包括以下步骤：1、致敏：分别于第1天、第8天和第15天对BALB/c小鼠颈后皮下注射200μl葎草花粉致敏液。2、激发：给小鼠雾化吸入1μg/μl的葎草花粉蛋白浸液，连续7天，每天30min。本模型用葎草花粉蛋白提取液对BALB/c小鼠进行皮下注射致敏和雾化激发，成功构建了葎草花粉致敏的小鼠哮喘模型。模型小鼠可以很好的模拟葎草花粉致敏引起的人类哮喘的典型特征。该模型将为我们研究葎草花粉致敏引起的人类哮喘的发病机制及探索新的治疗方法提供良好平台。

技术领域

本发明涉及一种新的过敏性哮喘小鼠模型的构建方法，即构建葎草花粉致敏的小鼠哮喘模型的方法。

背景技术

过敏性哮喘是由吸入过敏原引起的复杂的多因素作用疾病，全球发病率日益升高。在我国，一年生草本植物葎草(Humulus scandens)，因生长条件要求低，在全国范围内广泛分布，其花粉是引起夏秋季过敏性哮喘的重要原因。

要研究葎草花粉致敏引起的哮喘的发病机制，寻找更有效的治疗方法，动物模型是重要的工具。而小鼠由于肺部结构、组织学和功能特征与人类相似，饲养费用低，便于发展转基因模型等特点，成为最常用的模型研究对象。一个典型的过敏性哮喘小鼠模型应该能够模拟人类过敏性哮喘的主要免疫学特征：如可逆的气道阻塞，气道高反应性，以嗜酸性粒细胞浸润为主的呼吸道慢性炎症，血清过敏原特异性IgE显著增加，Th2类细胞因子(如IL-4，IL-13)的表达升高，Th1类细胞因子(如INF-γ)的表达降低等。

小鼠过敏性哮喘模型的构建通常包括致敏和激发两部分。常用的致敏的方式有皮下注射、腹腔注射、呼吸道直接接触等，激发的方式有滴鼻、雾化等。不同的致敏和激发方式会在一定程度上影响小鼠的免疫反应。目前文献报道的葎草花粉致敏小鼠哮喘模型，主要采用腹腔注射致敏和滴鼻激发的方式构建。但在我们的实验中发现：腹腔注射方式致敏引起的气道反应性较低，炎症反应较弱、血清学变化不明显，不能较好的模拟人类哮喘的典型特点，而滴鼻激发的方式又由于对气道直接的强烈刺激，容易引起小鼠的急性肺损伤，造成小鼠死亡。

发明内容

本发明的技术目的是构建一个可以更好的模拟葎草花粉致敏引起的人类过敏性哮喘典型特点的小鼠模型。

本发明采用的技术方案是：

一种葎草花粉致敏的小鼠哮喘模型的构建方法，包括步骤：

(1)致敏：分别于第1天、第8天和第15天对BALB/c小鼠颈后皮下注射200μl葎草花粉致敏液；

(2)激发：给小鼠雾化吸入1μg/μl的葎草花粉蛋白浸液，连续7天，每天30min。

上述方案是经过多次大胆假设、小心求证后得到的最佳技术方案，其中若采用滴鼻激发的方式，根据本发明的优选实施例2，模型组小鼠，用葎草花粉蛋白连续2次滴鼻激发后，总计66.7％(10/15)的小鼠死亡。肺功能显示，小鼠气道失去了对乙酰甲胆碱(Mch)刺激的反应能力。肺部病理切片也符合急性肺损伤的特点。因此，滴鼻激发的方式并不适合用来构建本模型。

同一种过敏原不同的致敏途径会引起程度甚至种类不同的免疫反应。根据本发明的优选实施例3，比较了腹腔注射致敏和皮下注射致敏建立哮喘模型的效果。结果显示：相比于腹腔致敏组，皮下致敏组小鼠血清中的葎草花粉特异性IgE的表达量更高，脾匀浆液、肺细胞灌洗液(BALF)中TH2类细胞因子(IL-4、IL-13)表达量更高；肺细胞灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量和比例更高，AB-PAS染色中，气道中有更多的粘液分泌，小鼠有更强的气道高反应。这些特点说明，通过皮下注射致敏构建的小鼠哮喘模型，更符合人类过敏性哮喘的典型特征。

综合上述，本发明采用皮下注射葎草花粉变应原致敏，雾化吸入葎草花粉变应原激发的方式构建的葎草花粉致敏小鼠哮喘模型，可以最大程度上模拟葎草花粉致敏引起的人类过敏性哮喘的典型特征，且可以避免腹腔注射和滴鼻激发方式带来的不良后果。