[发明专利]一种脐血调节性T细胞体外扩增方法在审
| 申请号： | 201711305564.6 | 申请日： | 2017-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN108004209A | 公开（公告）日： | 2018-05-08 |
| 发明（设计）人： | 付亚茹;孙阳阳;王洪星;曲廷瑜 | 申请（专利权）人： | 山东省齐鲁干细胞工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250102 山东省济南市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 调节 细胞 体外 扩增 方法 | ||
1.一种脐血调节性T细胞体外扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）细胞分离：新鲜脐血与PBS缓冲液1:1混合，缓慢加入等体积Ficoll淋巴细胞分离液中，密度梯度离心；收集单个核细胞白膜层，离心，弃上清液，获得脐血单个核细胞沉淀，细胞沉淀用PBS缓冲液重悬，离心，弃上清液，获得脐血单个核细胞；
（2）细胞培养：将步骤（1）制得的单个核细胞和细胞培养液混合，得到细胞悬液，接种至包被anti-CD3抗体的增殖培养皿中，添加Tregs细胞增殖培养液诱导培养；
（3）细胞扩增培养：培养至第6天，将细胞转移至不包被anti-CD3抗体的培养皿中，休整培养至第8天，将细胞再次转移至包被anti-CD3抗体的Tregs细胞增殖培养皿中，体外扩增培养第14天，收取扩增后的细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中脐血单个核细胞接种密度为0.5-1×10
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）、（3）中Tregs细胞增殖培养液为Gibco RPMI 1640培养液添加10% FBS、2000IU/ml IL-2、100ng/ml anti-CD28抗体、5ng/mlTGF-β，培养时每三天更换一次培养液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中休整培养时，细胞培养液为Gibco RPMI 1640培养液添加10% FBS，2000IU/ml IL-2。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）、（3）培养的条件为37℃、5% CO
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述的细胞扩增后数量为起始细胞的1000-3000倍。
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