[发明专利]一种罗湖病毒Taq-man探针荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201711304449.7 | 申请日： | 2017-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN108018378A | 公开（公告）日： | 2018-05-11 |
| 发明（设计）人： | 曾伟伟;王庆;王英英;尹纪元;张德锋;李莹莹;汤亚方;任燕;石存斌;刘春;常藕勤 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 佛山帮专知识产权代理事务所(普通合伙) 44387 | 代理人： | 颜春艳 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 taq man 探针 荧光 定量 pcr 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种罗湖病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括RT-PCR反应液、Taq酶、逆转录酶、罗湖病毒荧光定量反应液以及无RNA酶的去离子水；其中，
所述的罗湖病毒荧光定量反应液包括两条检测罗湖病毒的引物和一条检测罗湖病毒的探针，所述的两条检测罗湖病毒的引物的序列分别为：
上游引物TiLV-PF Seq No.1：5'GAC TGC AGC TAT GTT ATC TGG 3'；
下游引物TiLV-PR Seq No.2：5'TGG TGT AAG TGG GGT TGT T 3'；
所述的检测罗湖病毒的探针的序列如下：
探针TiLV-P Seq No.3：5'AAG CAG CAG GAA TGT GCC TAT3'；
所述的检测罗湖病毒的探针在其5'端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述罗湖病毒荧光定量PCR检测试剂盒中包括RT-PCR反应液12.5μL，Taq酶0.5μL，逆转录酶0.5μL，罗湖病毒荧光定量反应液4μL，无RNA酶的去离子水2.5μL。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述罗湖病毒荧光定量反应液为将5μL的100uM上游引物TiLV-PF、5μL的100uM下游引物TiLV-PR以及4μL的100uM探针引物TiLV-P加入169μL无RNA酶的去离子水中制得。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM、HEX、ROX、CY3或者CY5；所述的荧光淬灭基团为TAMRA、BHQ1、BHQ2或者BHQ3。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的逆转录酶为M-MLV逆转录酶，所述的Taq酶为热启动Taq酶。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒中还含有罗湖病毒的阳性对照参考品：灭活的罗湖病毒TiLV-ZJ1710株的培养液。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒中还含有阴性对照参考品：无RNA的去离子水。
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