[发明专利]一种纯化有机酸肽的方法

说明书

本发明涉及一种纯化多肽药物的方法，特别涉及一种纯化有机酸肽的方法。包括如下步骤：树脂处理：将阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；转盐：将多肽粗品加水溶解，加入有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；纯化：将转盐后收集的滤液经过反相色谱柱进行纯化，分段收集洗脱液，进行浓缩冻干或直接冻干，得到粉末状有机酸肽纯品。本发明结合有机酸根型的阴离子交换树脂和反相高效液相色谱，最终可获得纯度99％以上，收率为50％以上的有机酸肽。

技术领域

本发明属于多肽纯化的技术领域，特别是涉及一种纯化有机酸肽的方法。

背景技术

全球多肽药物的研发已广泛涉足疫苗、抗肿瘤药物、心脑血管药物、抗病毒多肽以及抗菌活性肽、诊断试剂盒的研究。多肽药物的制备主要通过人工合成，其中Fmoc法是在Boc法的基础上发展起来的一种多肽固相合成的新方法，该法具有反应条件温和、副反应少、产率高、易于检测控制反应等优点，成为合成多肽的常用方法。但该法合成的多数肽是在TFA体系下分离纯化的，获得的粗品中会含有游离的TFA和TFA盐，游离的TFA和TFA盐会影响多肽的理化性质，虽然游离的TFA通过冻干容易除去，但与肽形成的TFA盐，因存在强的离子键，难以通过冻干除去。

目前主要通过离子交换法和反相色谱法实现多肽转盐。此法下获得的多肽盐包括药学上可用的盐(如醋酸盐)和其他有机酸盐。为了进一步得到纯度高的多肽产品，通常采用反相高效液相色谱，根据多肽及其类似物的亲疏水性差别，实现它们的分离。现在世界主要的化学合成多肽公司，如Bachem公司，Novabiochem公司、American Peptide公司等，其最主要制备分离纯化的方法还是依赖于反相高效液相色谱。

申请号为201110073257.6的发明专利公开了一种戈舍瑞林多肽的纯化方法，经Source柱和反相色谱柱进行梯度洗脱纯化，得到较高纯度的戈舍瑞林三氟乙酸盐，然后采用阴离子交换转盐法转成醋酸盐，最终获得纯度达98％以上，收率40-46％的纯品醋酸肽，纯化效率和收率都不理想，且已发表的文献和专利中，没有出现规模化生产具有高收率的纯化有机酸肽的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种简单、节约成本、纯化效率高的纯化有机酸肽的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种纯化有机酸肽的方法，包括如下步骤：

步骤1、树脂处理：阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；

步骤2、转盐：将多肽粗品加水溶解，加入步骤1的有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；

步骤3、纯化：反相色谱柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，所述流动相B为乙腈和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，将步骤2所得的滤液上样，进行洗脱，分段收集洗脱液，将洗脱液浓缩后冻干或直接冻干，获得粉末状有机酸肽纯品。

本发明的有益效果在于：本发明先采用有机酸根型的阴离子交换树脂将多肽粗品转有机酸盐，再进行反相高效液相色谱纯化，能减少有机酸根型的阴离子交换树脂的使用量，减少生产成本；本发明结合有机酸根型的阴离子交换树脂和反相高效液相色谱纯化可获得纯化高达99％以上，收率为50％以上的有机酸肽，不仅操作更简单，缩短制备时间、原材料便宜易得、价格成本更低，而且不存在大量使用流动相的问题，减少对环境污染，更适合规模化纯化有机酸肽的工艺方法，达到产业化要求。

附图说明

图1为本发明具体实施方式中实施例1的甲酸爱啡肽纯品纯度的HPLC图；

图2为本发明具体实施方式中实施例2的苹果酸奥曲肽纯品纯度的HPLC图；