[发明专利]猪细小病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种猪细小病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒包括酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清和酶标二抗，其中所述酶标板包被有猪细小病毒结构蛋白抗原表位多肽组合物。该抗原表位多肽组合物为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。本试剂盒使用化学合成抗原肽包被酶标板，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在猪细小病毒的结构蛋白抗体。本发明试剂盒敏感性高、特异性好、且操作便捷，具有良好的市场前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种猪细小病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

猪细小病毒(Porcine parvovirusVirus,PPV)是造成母猪繁殖障碍的重要病原之一。PPV感染猪群后，对成年猪引起症状较轻,但对不同孕期的母猪感染后会造成死胎、木乃伊胎和流产等不同临床症状。病原体感染机体后会导致慢性持续性感染，并不断向周围环境排毒，养殖场的PPV感染阳性率很高。在不同国家和地区,其报道的血清阳性率为40.7％-99.6％，我国不同地区血清阳性率为50.1％-98％之间。若预防控制不当，该病能在同一养殖区域连续发生几年甚至十几年的流行，造成繁殖失败，给养猪业带来较大的经济损失。

PVV是细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus)的成员，病毒粒子呈圆形或六边形，无囊膜，为直径约20nm的单链DNA病毒。病毒基因组大约长5kb，包含多于两个开放阅读框，靠近5’端的开放阅读框主要编码非结构蛋白NS1、NS2和NS3，这些非结构蛋白主要参与病毒的复制。靠近3’端的开放阅读框编码结构蛋白VP1、VP2和VP3，分子量大小分别为84kd、64kd和60kd。衣壳蛋白由VP1、VP2和VP3组成，其中主要的衣壳蛋白为VP2，其对PPV的嗜性和毒力强弱影响很大。

猪细小病毒在我国各养殖场检测的血清阳性率较高，对该病的血清学诊断方法中，血清中和试验、血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、琼脂扩散试验等是常用的检验方法，其中血凝抑制试验和酶联免疫吸附试验最为常用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测猪细小病毒结构蛋白抗体的间接ELISA检测试剂盒，该试剂盒利用猪细小病毒结构蛋白VP1、VP2和VP3抗原表位多肽作为包被抗原，建立了一种特异性、敏感性和重复性好的间接ELISA方法，用于检测猪血清中是否含有猪细小病毒结构蛋白抗体。

为了达到上述目的，本发明首先筛选得到了性能优异的猪细小病毒抗原表位多肽组合物，本发明提供的猪细小病毒结构蛋白抗原表位多肽组合物，为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。当所述多肽组合物为序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的两种时，两种多肽的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1；当所述多肽组合物为序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的三种时，任意三种多肽的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1：1；

当所述多肽组合物由序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽组成时，它们的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1：1：1。

本发明的猪细小病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒，包括酶联反应板、阳性对照血清、阴性对照血清和酶标二抗，其中所述酶联反应板包被有猪细小病毒结构蛋白抗原表位多肽组合物。

所述酶联反应板为可拆卸96孔酶标板；所述猪细小病毒结构蛋白抗原表位多肽组合物中的多肽均为化学人工合成得到。