[发明专利]一种地表水体浮游藻类叶绿素a含量测定方法

说明书

本发明公开了一种地表水体浮游藻类叶绿素a含量的测定方法，使用混合纤维素脂微孔滤膜在抽滤装置上对集取的地表水体过滤获得浮游藻细胞，滤膜存放离心管内并放置冰柜冷藏，反复冻融，使用无水乙醇直接浸提截留有浮游藻类的滤膜，摇晃后黑暗处室温浸提18h，之后摇匀浸提液使用离心机离心，取上清液利用分光光度法在630nm、645nm、663nm和750nm波长下测定吸光度值，计算地表水体中的浮游藻类叶绿素a的含量。本发明无需研磨；无需剪碎滤膜；无需控制浸提温度，自然条件下操作进行；使用对人体无害的无水乙醇作浸提液；叶绿素损失少，提取完全，结果重现性好。

技术领域

本发明涉及一种地表水体浮游藻类叶绿素a含量测定方法，属于水环境监测技术领域。

背景技术

在地表水环境的富营养化程度研究中，叶绿素a是用来表征浮游植物生物量的重要指标。目前测定浮游藻类叶绿素a的方法主要有高效液相色谱法、荧光光度法和分光光度法等。其中，分光光度法因操作简便、可靠性强的特点应用最为广泛。

采用分光光度法测定叶绿素a时，丙酮和乙醇是目前最为常用的有机提取溶剂。其中，丙酮有毒性，对人体的健康不利。另外，文献《浮游植物叶绿素a含量测定方法的比较测定》验证了丙酮的叶绿素a提取效果没有乙醇提取的效果好。因此，叶绿素a含量的测定越来越倾向于乙醇法。

现有的关于用乙醇提取叶绿素a的方法比较多且实验条件也有许多差异。哈尔滨工业大学的张素春等(专利公开号CN102590118A)使用90％乙醇溶液冷藏12-24h提取叶绿素a；同济大学的周雪飞等(专利公开号CN101858857A)使用80℃的90％乙醇经水浴超声后避光3-5h提取叶绿素a；南开大学的刘春光等(专利公开号CN106908395A)使用无水乙醇室温6-24h提取叶绿素a。鉴于此，对现有的方法作一定的调整和改进，研究一种新的浸提和测定叶绿素a含量的优化方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种操作简便、安全环保、结果可靠、优化实用的地表水体浮游藻类叶绿素a含量测定方法。

为解决上述技术问题，本发明提供一种地表水体浮游藻类叶绿素a含量的测定方法，其特征是，使用混合纤维素脂微孔滤膜在抽滤装置上对集取的地表水体过滤获得浮游藻细胞，滤膜存放离心管内并放置冰柜冷藏，反复冻融，使用无水乙醇直接浸提截留有浮游藻类的滤膜，摇晃后黑暗处室温浸提18h，之后摇匀浸提液使用离心机离心，取上清液利用分光光度法在630nm、645nm、663nm和750nm波长下测定吸光度值，计算地表水体中的浮游藻类叶绿素a的含量。

优选地，所述混合纤维素脂微孔滤膜的孔径是0.45μm，直径50mm。

优选地，所述滤膜不剪碎存放在10mL连盖离心管内。

优选地，所述冰柜冷藏温度为-20℃，冷藏8h以上。

优选地，所述反复冻融是指冷藏后，取出所述滤膜黑暗静处放置10～15min，再放回冰柜冷藏10～15min，如此反复2～3次。

优选地，所述浸提液摇晃条件为手动120次/min，摇晃0.5min。

优选地，所述室温条件为20～29℃。

优选地，所述浸提液离心条件为4000r/min，离心15min，离心温度为8℃。

优选地，所述分光光度法使用光程为10mm的玻璃比色皿，无水乙醇作参比液进行比色。

优选地，计算地表水体浮游藻类叶绿素a含量的公式为：Chl-a＝[11.64*(D₆₆₃-D₇₅₀)-2.16*(D₆₄₅-D₇₅₀)+0.1*(D₆₃₀-D₇₅₀)]*V₂/V₁，