[发明专利]一种糖苷键质谱碎裂型化学交联剂及其制备方法

权利要求书

1.一种糖苷键质谱碎裂型化学交联剂的制备方法，其特征在于：

步骤一，以海藻糖为起始原料，在碱性条件下，两个伯羟基与溴乙酸反应，制备海藻糖二羧酸；

步骤二，以海藻糖二羧酸为原料，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（简称EDCI）为缩合剂，与N-羟基琥珀酰亚胺（简称NHS）发生酯化反应，即制得海藻糖交联剂；

具体步骤如下：

。

2.一种糖苷键质谱碎裂型化学交联剂的制备方法，其特征在于：

步骤一，二糖的全乙酰化，在乙酸酐/吡啶体系中，制备全乙酰二糖；

步骤二，全乙酰二糖在路易斯酸作用下，与含羟基的富集试剂反应，在乙酰二糖1号位引入富集基团，制备修饰富集基团的乙酰二糖；

步骤三，修饰富集基团的乙酰二糖在碱性条件中去乙酰化，制备修饰富集基团的二糖；

步骤四，修饰富集基团的二糖在四甲基哌啶氮氧化物（简称TEMPO）/次氯酸钠氧化体系下，将二糖两个伯羟基氧化成二羧基，制备修饰富集基团的二糖二羧酸；

步骤五，修饰富集基团的二糖二羧酸为原料，以EDCI为缩合剂，与NHS发生酯化反应，即制得修饰富集基团的二糖交联剂；

具体步骤如下：

其中

中的一种；

二糖为麦芽糖、纤维二糖及乳糖中的一种。

3.根据权利要求1所述的制备方法，特征在于：

步骤一中将海藻糖溶于异丙醇中，加入氢氧化钠固体，海藻糖与氢氧化钠摩尔比控制在1：5-10，温度控制在40-60 ℃搅拌0.5-1 h；随后称取溴乙酸，海藻糖与溴乙酸摩尔比控制在1：2.0-3.0，分批次加入反应体系，继续反应5-10 h，温度控制在40-60 ℃，停止反应，室温过滤并用甲醇淋洗，真空干燥6-12 h，即制得海藻糖二羧酸；

步骤二中将海藻糖二羧酸溶于二甲基亚砜中，依次加入NHS、EDCI，三者摩尔比控制在1：(3.0-4.0)：(3.0-4.0)，室温搅拌12-24 h；反应完毕，利用半制备反相色谱分离纯化，即制得海藻糖交联剂。

4.根据权利要求2所述的制备方法，特征在于：

步骤一中将二糖加入无水吡啶中，升温至微回流，使二糖全部溶解；恢复室温，滴加乙酸酐，控制乙酸酐与二糖摩尔比大于10：1；滴毕，室温反应12-24 h；反应完毕，除去溶剂及过量的乙酸酐，底物溶于二氯甲烷；有机相分别用饱和碳酸氢钠及饱和食盐水洗二次；有机相加入无水硫酸钠干燥，除去溶剂，粗品以二氯甲烷、石油醚混合液为流动相，通过柱色谱进一步纯化，即制得全乙酰二糖；

步骤二中将全乙酰二糖与含有羟基的富集试剂溶于二氯甲烷并降温至0℃，缓慢滴加三氟化硼乙醚溶液；全乙酰二糖、富集试剂与三氟化硼摩尔比控制在1:(3-10): (3-10)；滴毕，恢复室温反应过夜；反应液加入三乙胺中和过量的路易斯酸，有机相依次用饱和碳酸氢钠及饱和食盐水洗两遍，并用无水硫酸钠干燥；有机相除去溶剂，得到粗产物；以正己烷、二氯甲烷混合液为流动相，通过柱色谱进一步纯化，即制得修饰富集基团的乙酰二糖。

5.根据权利要求2所述的制备方法，特征在于：步骤三中将修饰富集基团的乙酰二糖溶于体积比为1：1四氢呋喃/甲醇中；称取相对于乙酰二糖的10-15当量的甲醇钠固体溶于甲醇中，室温条件缓慢加入反应液，继续反应2-5 h；反应完毕，滴加稀盐酸调pH值至中性；除去溶剂，粗品以氯仿、甲醇混合液为流动相，通过柱色谱进一步纯化，即制得修饰富集基团的二糖。