[发明专利]一种采用混合吸附树脂分离纯化植物叶片花色素苷的方法

说明书

本发明属于植物叶片有效成分分离纯化技术领域，具体涉及一种用混合吸附树脂分离纯化植物叶片花色素苷的方法。本发明采用非极性和中等极性树脂按一定质量比例混合，通过调控树脂骨架中不同极性组分的含量，以调节树脂疏水作用力，从而减弱树脂与花色素苷的吸附作用力，同时又不影响树脂对杂质的吸附能力，最终形成一种适用于植物叶片花色素苷的分离纯化的混合大孔树脂滤体。

技术领域

本发明属于植物叶片有效成分分离纯化技术领域，具体涉及一种用混合吸附树脂分离纯化植物叶片花色素苷的方法。

背景技术

花色素苷作为植物中最重要、分布最广泛的一类有色物质，是植物花瓣、叶和果实中几乎所有颜色的物质基础。花色素苷具有类黄酮的基本结构，即两个芳香环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化合物，其具有以下结构：

根据B环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素苷主要分为六类：R1＝R2＝H时为天竺葵色素(pelargonidin)；R1＝OH、R2＝H时为矢车菊色素(cyanidin)；R1＝OMe、R2＝H时为芍药色素(peonidin)(3'-甲基矢车菊色素)；R1＝R2＝OH时为飞燕草色素(又名翠雀素)(delphinidin)；R1＝OMe、R2＝OH时为矮牵牛色素(petunidin)(3',5'-甲基飞燕草色素)；R1＝OMe、R2＝OMe时为锦葵色素(malvidin)(3',5'-二甲基飞燕草色素)。自然条件下游离的花色素苷极少见，主要以糖苷形式存在，拥有不同的花色素苷种类和组分可使植物花、叶、果实等组织器官呈现出各种各样的颜色，从红色、蓝色到紫色、黄色等，对其纯化分离后进行定性定量分析是研究植物组织器官呈色机理的重要方法。另外，花色素苷作为一种具有生物活性的天然色素，具有抗氧化作用和清除自由基能力，可提高植物自身抗逆境能力。其种类繁多、来源广泛、安全无毒，对人体也有一定的营养和保健功效，许多富含花色素苷的植物和蔬菜还可作为天然色素的良好来源，所以对花色素苷纯化分离工艺在食品、药品和化妆品中也得到了广泛的关注。

大孔树脂吸附法具有树脂品种多、吸附力强、结构可调控、分离工艺简单、适用范围广、选择性高、效率高等特点。不同型号的大孔树脂因所选用的单体分子结构不同，其极性不同，一般分为非极性、中等极性、极性和强极性四种类型，分别适用于不同有效成分和有效部位的分离纯化，使用时要加以选择才能达到对有效成分分离纯化的最佳水平。

花色素苷粗提物中所含有的杂质以疏水性较强的组分为主，较为亲水的花色素苷通常采用非极性或中等极性大孔树脂作为提纯介质，在不同程度满足对花色素苷的吸附作用力时，树脂对杂质具有更强的吸附力，导致解吸过程中花色素苷与杂质很难实现完全分离，从而影响花色素苷获得的数量和纯度。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种采用非极性和中等极性混合树脂从叶片花色素苷粗提液中分离纯化花色素苷的方法，该方法通过调控树脂骨架中不同极性组分的含量，来调节树脂的疏水作用力，从而减弱树脂与花色素苷的吸附作用力，同时又不影响树脂对杂质的吸附能力，最终形成一种适用于植物叶片花色素苷的分离纯化的混合大孔树脂滤体。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种采用混合吸附树脂分离纯化植物叶片花色素苷的方法，包括以下步骤：

步骤1：取植物新鲜叶片，剪碎后加入提取液，每1g样品加10mL提取液，研磨至匀浆，超声提取，然后进行沸水浴，冷却后用体积分数60％的乙醇稀释1.5～2倍，然后取上清过0.45μm滤膜，即得叶片花色素苷粗提溶液；

步骤2：取中等极性大孔树脂和非极性大孔树脂，分别进行活化预处理，将预处理后的树脂均匀混合，得混合树脂；

步骤3：取混合树脂置于带塞的磨口瓶中，每1g混合树脂加入30mL花色素苷粗提溶液，25℃水浴振荡1～2.5h，抽滤，接收滤液；