[发明专利]一种产ESBLs细菌检测试剂和检测产ESBLs细菌的试剂盒在审
申请号: | 201711285970.0 | 申请日: | 2017-12-07 |
公开(公告)号: | CN107723334A | 公开(公告)日: | 2018-02-23 |
发明(设计)人: | 郑业焕;汪礼琴;鲁清月;伊首璞;方娟;吕高原;崔晓莉;丰欣欣;付光宇;吴学炜 | 申请(专利权)人: | 郑州安图生物工程股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/04 | 分类号: | C12Q1/04 |
代理公司: | 郑州异开专利事务所(普通合伙)41114 | 代理人: | 王霞 |
地址: | 450016 河南省*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 esbls 细菌 检测 试剂 试剂盒 | ||
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域,尤其是涉及一种产ESBLs细菌检测试剂,本发明还涉及检测产ESBLs细菌的试剂盒。
背景技术
超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药的主要机制之一,自1982年在英格兰首先发现产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)克雷伯菌后,产ESBLs细菌的流行在世界各地广泛报道,其预防与治疗已成为临床医生需要面对的重要问题。ESBLs主要存在于临床分离的革兰阴性杆菌,其中又多见于肠杆菌科细菌。在肠杆菌科细菌中以大肠埃希菌和克雷伯菌最为常见,克雷伯菌包括肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌。其他常见产ESBLs细菌有产气肠杆菌、变形杆菌、沙门属菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属等。
各个国家和地区产ESBLs细菌的发生率明显不同。日本、荷兰等国家产ESBLs细菌的发生率很低,而法国、印度等国家产ESBLs细菌的发生率很高,可有高达50%以上的克雷伯菌属的细菌产生ESBLs,而且具有较严重的耐药性。我国大陆不同研究者报告的产ESBLs细菌发生率各有不同,大肠埃希菌发生率大约在40%,肺炎克雷伯菌发生率更低一些。
产ESBLs细菌主要在医院内引起感染和流行,其中60%发生在大型医院,特别是教学医院。产ESBLs细菌不仅能引起院内暴发流行,还可以向院外传播,使流行范围扩大。研究显示,重症监护病房、住院日延长(≥7d)、机械通气、导尿管和动脉导管的留置、严重疾病状态(如器官移植)、不适当联合使用抗菌药物或三代头孢菌素、年龄≥60岁等都是导致产ESBLs细菌感染的危险因素。
临床产ESBLs细菌的检测方法主要包括有:纸片扩散法(K-B法),肉汤稀释(MIC)法,琼脂稀释(MIC)法,浓度梯度(E试验)法,自动化药敏检测,琼脂显色筛选法及分子生物学技术。其中纸片扩散法(K-B法),肉汤稀释(MIC)法,琼脂稀释(MIC)法,浓度梯度(E试验)法,自动化药敏检测这几种方法是传统的耐药菌检测主要方法和手段,是公认的敏感性检测方法,也是当前临床耐药菌检测的主要方法,但是这些检测方法面对的均是临床分离活化后的菌株,针对临床样本是无法直接使用的,存在操作麻烦、检测周期长的问题。琼脂显色筛选法和分子生物学法是近几年新型的耐药菌检测技术,可以直接进行耐药菌的检测,有效缩短了检测周期,但由于检测成本高,在使用中受到一定的限制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种产ESBLs细菌检测试剂,本发明还提供操作方便、检测周期短且成本低的产ESBLs细菌检测试剂盒。
为实现上述目的,本发明可采取下述技术方案:
本发明所述的产ESBLs细菌检测试剂,其检测试剂溶液中包括有以下成分(按质量浓度计):0.1~3%的胰酪胨,0.1~2%的酵母浸粉,0.05~1%的牛肉浸粉,0.1~2%的NaCl,0.05~2%的3-吗啉丙磺酸,0.05~2%的丙酮酸钠,0.05~2%的硝酸钾,0.05~2%的海藻糖,0.006%的酚红,0.0001-0.01%的亚甲基蓝,0.001%的制霉菌素,0.015%的牛胆盐,0.001%的万古霉素。
本发明所述的一种产ESBLs细菌检测试剂盒,包括带有培养液、矿物油和检测板的盒体,所述检测板上间隔设置有阳性孔和产ESBLs细菌检测孔;所述阳性孔和产ESBLs细菌检测孔内分别包被有上述检测试剂,其中每孔的包被量为100ul;所述培养液为含有0.5-1%的氯化钠溶液,所述矿物油为液体石蜡油。
所述产ESBLs细菌检测孔至少包含检测头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南三种抗生素中一种以上的产ESBLs细菌的检测孔。
所述头孢噻肟检测孔中包被有1-8ug/mL的头孢噻肟,所述头孢他啶检测孔中包被有1-8ug/mL的头孢他啶;所述氨曲南检测孔中包被有1-8ug/mL的氨曲南,每孔的包被量均为100ul。
本发明试剂盒使用时,首先将待检样本加入培养液中搅拌混匀,然后将其分别接种进阳性孔和产ESBLs细菌检测孔中,每孔100 ul;再分别滴加一滴矿物油,盖上检测板盖后置于36~38℃培养,24h后通过颜色变化直接观察结果。
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