[发明专利]一种表皮细胞生长因子的制备方法及应用

权利要求书

1.一种表皮细胞生长因子的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)材料选取

选取健康奶羊的乳液进行取样，采样后立即在-40℃冷冻保存备用；

(2)离心处理

将冷冻的乳样4℃解冻后，用移液枪吸取乳样置于离心管中，然后在5000r/min低温(4℃)离心10min，除去上层乳脂，取上清液；

(3)透析

将所述上清液装入截留分子量3500Da的透析袋，4℃对0.02mol/LTris-HCL(8.0)透析30～50分钟，然后更换缓冲液重复透析，得到透析液；

(4)提取

将所述透析液过Q Sepharose Fast Flow柱(5.5cm*20cm)，进行洗脱，流速2～4ml/分钟的流速，先用300～500ml 0.002mol/LTris-HCL(pH8.0)缓冲液洗脱杂蛋白峰、450～650ml 0.5mol/L NaCl的0.002mol/LTris-HCL(pH8.0)的缓冲液进行洗脱，收集目标蛋白峰，并用紫外检测仪在280nm波长处进行检测。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：还包括纯化步骤，将收集到的目标蛋白峰即表皮生长因子，装入截留分子量3500Da的透析袋，4℃对0.02mol/L Tris-HCL(8.0)透析30～50分钟，然后更换缓冲液重复透析，得到纯化表皮生长因子因子溶液。

3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述材料选取步骤，优选采用人工挤奶方式进行取样，采样时弃去前5把奶。

4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述离心处理步骤中选用高速冷冻离心机进行离心。

5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述透析步骤中，透析次数为4-8次。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述透析步骤中，透析次数为6次。

7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述纯化步骤中，透析次数为4-8次。

8.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述纯化步骤中，透析次数为6次。

9.通过对权利要求1、2、7、8任一项所述制备方法取得的表皮细胞生长因子运用冻干技术和脂质体包埋技术获得的表皮生长因子新剂型，其特征在于，通过口服给药的方式使EGF的功效能作用于全身。

10.如权利要求9所述的表皮生长因子新剂型，其特征在于，根据给药形式来确定其制剂的剂型，赋形剂、稀释剂、载体。