[发明专利]一种鲟鱼TALEN基因编辑方法有效
| 申请号： | 201711282301.8 | 申请日： | 2017-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN108034675B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 胡红霞;陈戟;胡炜;朱华;王巍;朱作言 | 申请（专利权）人： | 北京市水产科学研究所;中国科学院水生生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/89 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 龚莹莹 |
| 地址： | 100070 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鲟鱼 talen 基因 编辑 方法 | ||
1.一种鲟鱼TALEN基因编辑的方法，包括将靶基因质粒和针对靶位点的TALEN mRNA混合后，利用显微操作的方式注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵动物极的受精孔中；
所述的受精卵的制备方法包括：挑选性成熟的小体鲟亲鱼，在室内养殖系统中暂养；距人工繁殖25小时前，注射LHRHa和DOM混合物进行人工催产，注射剂量为10μg LHRHa+1mgDOM/kg体重，每隔12个小时注射1次，雌性鲟鱼连续注射2次，雄性鲟鱼注射1次；待亲鱼有排精/排卵迹象，挤出精液到干燥的烧杯，挤出卵到玻璃平皿；用0.3×Danieau buffer将精液稀释100倍，进行人工授精；受精时间1-2分钟，随后洗去多余的精液，即获得可用于显微注射的小体鲟受精卵；
所述的Danieau buffer为：17mM NaCl，2mM KCl，0.12mM MgSO4，1.8mM Ca(NO3)2，1.5mMHEPES，pH 7.6。
2.根据权利要求1所述的方法，靶基因质粒浓度为100ng/μL，针对靶位点的TALEN mRNA的浓度为100ng～500ng/μL。
3.根据权利要求2所述的方法，每枚受精卵注射体积为2nL。
4.根据权利要求2所述的方法，TALEN mRNA的浓度为300ng/μL，TALEN mRNA的左臂和右臂靶点的mRNA按照1:1的质量比混合。
5.根据权利要求1所述的方法，所述的鲟鱼包括小体鲟、施氏鲟(A.schrenckii)、俄罗斯鲟(A.gueldenstaedtii)、西伯利亚鲟(A.baerii)。
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