[发明专利]抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用

说明书

抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用。本发明公开了一种抗跨膜酪氨酸激酶受体的单链抗体、一种抗CD3E的单链抗体及其融合蛋白及其应用，所述融合蛋白具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，其对三种不同类型的肿瘤细胞系，均有明显的生长抑制作用，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。

技术领域

本发明公开了一种抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用，属于免疫学和分子生物学领域。

背景技术

肿瘤是威胁人类生存最大的疾病。世界卫生组织研究显示，2012年中国癌症发病人数为306.5万，约占全球发病的五分之一；癌症死亡人数为220.5万，约占全球癌症死亡人数的四分之一。

肿瘤的形成和发展具有非常复杂的调节机制，有非常多的生物效应分子参与其中。明晰这些生物效应分子的作用机制，对于肿瘤疾病的预防和治疗具有重要的意义。

EphA2是一个跨膜酪氨酸激酶受体，属于酪氨酸激酶受体(receptor tyrosinekinases，RTKs)超家族成员之一。EphA2通常以相对较低的水平表达在成人各种上皮细胞中，其在介导相应的信息传递过程中起着关键性的作用，调控着许多方面的细胞行为。近来研究显示，EphA2在多种肿瘤组织中高表达，进一步的研究证实EphA2过表达促进肿瘤向恶性发展。因其在正常及肿瘤组织中表达的差异性，加之其有别于其他RTKs的结构及功能的特异性，目前EphA2被认为是一个很有潜力的靶点，正成为各种肿瘤防治研究的焦点。

在许多肿瘤细胞模型和临床样本中，均报道EphA2高水平的表达，包括乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌、高侵袭性黑色素瘤、宫颈癌、卵巢癌、恶性间皮细胞瘤等。并且研究发现，EphA2的表达与多种恶性肿瘤的病理分级及临床分期相关。

CD3分子是T淋巴细胞表面抗原和TCR一起活化T细胞，引起细胞免疫应答。CD3分子由4条不同的链组成，其中E链是作为协同TCR向胞内传递活化信号的重要亚基。已上市的人源化CD3抗体OKT3就是特异性针对CD3E链的活化抗体。

传统的治疗肿瘤的方法是手术或者放、化疗。随着近年生物制药技术的发展，一批优质的抗肿瘤抗体药物的问世，使得一些难治性肿瘤的生存率大大提高。抗体药物已作为肿瘤患者常规的治疗药物之一，预计2020年，单抗药物的销售额将达到2000亿美元。自从1984年第一个基因工程抗体人－鼠嵌合抗体诞生以来，新型基因工程抗体不断出现，如人源化抗体、单价小分子抗体(Fab、单链抗体、单域抗体、超变区多肽等)、多价小分子抗体(双链抗体，三链抗体，微型抗体)、某些特殊类型抗体(双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗体、催化抗体、免疫脂质体)及抗体融合蛋白(免疫毒素、免疫粘连素)等等。另外，用于制备新型抗体的噬菌体抗体库技术成为继杂交瘤技术之后生命科学研究中又一突破性进展。

对于血液性肿瘤，全分子抗体药物具有优势，它们可以激活补体和免疫细胞将血液中游走的肿瘤细胞杀死，但是对于实体肿瘤，由于全分子抗体药物分子量大，进入不到实体瘤内部，它们的抗肿瘤效果不理想。而小分子抗体却可以轻松进入实体瘤内部发挥抗肿瘤作用。未来的抗体药物将以小分子抗体药物为主。小分子抗体药物尤其对中国来说更为必须，因为在中国多发的肺癌、肝癌和消化道系统肿瘤中绝大多数都是实体性肿瘤。中国男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。而在肺癌中也有些是死亡率非常高的转移性肿瘤，如肺癌的脑转移发生率可以达到35％～50％，多个部位的骨转移发生率可以达到50％。对于脑和骨转移的癌症治疗，小分子抗体药物就可以发挥其无法替代的抑制转移作用。