[发明专利]诱导分泌高含量细胞壁降解酶的芦笋茎枯病菌、细胞壁降解酶及抗茎枯病品种的筛选方法

说明书

本发明公开一种诱导分泌高含量细胞壁降解酶的芦笋茎枯病菌、细胞壁降解酶及抗芦笋茎枯病品种的筛选方法，属于生物技术领域。本发明提供的诱导分泌高含量细胞壁降解酶的芦笋茎枯病菌为天门冬拟茎点霉Phomopsis asparagi，保藏编号为：CGMCC No.13874。本发明提供的诱导分泌高含量细胞壁降解酶的芦笋茎枯病菌可以诱导芦笋诱导分泌高含量防细胞壁降解酶，为抗病新品种选育和抗病品种合理布局服务。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种诱导分泌高含量防御酶的芦笋茎枯病菌。

背景技术

芦笋(Asparagus officinalis L.)为天门冬科天门冬属多年生草本植物，以嫩茎供食，具有极高的营养和保健价值，富含天冬酰胺、皂苷、黄酮、硒和植物多糖等多种活性成分，能抗肿瘤、抗氧化和降血脂，被誉为“蔬菜之王”、“世界十大名菜”之一(Jaiswal etal.，2014；Nishimura et al.，2013)。同时，芦笋加工产业链长，可生产出芦笋抗癌药、芦笋茶、酒和饮料等高附加值产品，在食品、医药等领域应用开发前景广阔。目前，我国芦笋种植及加工发展迅速，已成为世界第一大生产和出口国，种植面积超过95000公顷，约占全球的43％。病害是芦笋生产的重要制约因子，主要包括芦笋茎枯病、褐斑病和根腐病等，其中茎枯病危害最为严重，极易造成毁灭性影响。该病害在全球芦笋产区广泛存在；美国、希腊和澳大利亚等国均有报道，中国、日本和泰国等亚洲主产区因湿热气候和舶来品种生态适应性差导致病害发生十分严重；近年来，我国平均发病率居高不下，一般导致减产30％以上，严重时甚至引起成片绝收(陈光宇，2013；陈光宇，2010；Lu et al.，2008)。目前，生产上缺乏高抗茎枯病的芦笋栽培品种，主要依赖于化学农药或温室设施避雨栽培技术防控，不仅提高了生产成本，同时极易造成产品和环境的污染，加剧土壤质量严重退化。因此，茎枯病危害已成为制约我国芦笋生产可持续发展的突出问题。

天门冬拟茎点霉(Phomopsis asparagi)是引起芦笋茎枯病的病原真菌。目前，有关其致病接种方法、病害分级指标和病情评价体系已相对成熟 (Takahiro，1997)。前期研究表明，天门冬拟茎点霉为半活体营养寄生型 (Hemibiotrophs)丝状病原真菌，病菌无性分生孢子呈α(5.0～12.5× 1.8～3.8微米)、β(17.5～26.0×1.0～2.0微米)和中间型(12.0～17.0× 2.5～4.5微米)，α型占绝对优势，通常内含1～2个油球，主要危害嫩茎，也可侵染枝梗和拟叶，分生孢子接种后5～7天可获得明显病斑，病斑初呈水渍条状、后渐变成暗黑色梭条形，中部赤褐色凹陷，其上散生大量小黑点，为分生孢子器，随后病株枯死并迅速传染相邻植株，病菌以分生孢子(器) 或菌丝体越冬，适宜条件下进行初侵染和再侵染(Zhang et al.，2012；张岳平等，2012；Udayanga et al.，2011；陈光宇，2010；陈光宇，2005)。此外，芦笋茎枯病菌所属的天门冬拟茎点霉属(Phomopsis)真菌，该属是腔孢纲球壳孢科真菌中的一个大属，含有100多个不同的种，可寄生于70多种不同科的植物。该属病原菌地域分布广泛，引起植物的叶枯、枝枯、烂茎、溃疡及果腐等严重病害，造成重大经济损失。目前，一些主要作物的拟茎点霉属真菌病害在发生特点、致病症状及特性、生活周期循环、病害生化防控及病菌生物学特性方面等取得了一定的研究进展。芦笋茎枯病菌作为拟茎点霉属中重要成员，具备该属病原真菌的重要生物学特性，包括通过分生孢子器产孢、分生孢子内含1～2个油球、菌丝细胞壁成分相对复杂(Zhang Yueping et al.,Stressphysiology and virulence characterization of Phomopsis asparagi(Sacc.)Bubákisolated from asparagus in Jiangxi province,China,Agricultural science&technology,2012,13(7):1502-1508)。迄今为止，国内外对防御酶与芦笋茎枯病菌之间的关系研究报道较少。

发明内容