[发明专利]一种邻位连接技术用于定量检测RBP含量的试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种邻位连接技术用于定量检测RBP含量的试剂盒。所述试剂盒包括：RBP探针A、RBP探针B、连接缓冲液、qPCR反应液；本发明还公开了所述的一种邻位连接技术用于定量检测RBP含量试剂盒的制备方法，该方法包括：RBP探针A的制备、RBP探针B的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本明首次将邻位连接技术方法应用在RBP的定量检测上，与现有技术方法相比，具有灵敏性高、特异性强、高通量等优点，可提高肾功能疾病的预测的准确性，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种邻位连接技术用于体外免疫诊断检测人体内RBP的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

视黄醇结合蛋白(RetinoL Binding Protein，RBP)为血浆中由肝脏分泌的一种小分子蛋白质，由一条183个氨基酸残基组成的多肽链及少部分糖类组成，不含中性糖和氨基已糖，分子量为21,000Da。RBP主要由肝细胞的粗面内质网合成，广泛分布于人体血清、脑脊液、尿液及其他体液中，最终由尿排出。它也是血液中维生素A的转运蛋白，在维生素A的代谢中发挥重要作用。由于其半衰期较短，所以能较为敏感地反映机体的疾病状况。

近年来，RBP检测及临床应用日益受到关注，检测血清RBP和尿液RBP水平对肝脏、肾脏疾病的早期诊断和疗效观察有重要意义，也经常作为临床营养状况评价的指标，用来特异地诊断早期营养不良。

目前用于检测血、尿中RBP含量的方法较多，常用的有酶联免疫吸附试验法和免疫比浊法等。酶联免疫吸附试验法具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但酶联免疫吸附试验法的检测灵敏度较低，而现在应用于临床常采用免疫比浊法，该技术已趋于成熟，操作简便，干扰因素少，但液态的胶乳试剂稳定性不佳，检测结果精准性不佳。而本发明提出的基于一种邻位连接技术检测RBP含量的免疫诊断检测方法，具有检测灵敏度高、检测特异性强、样品损耗低、操作简单、检测设备常见等优势，将其应用于肾损伤疾病的监测，可以提高肾损伤疾病诊断的准确率，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测RBP的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于邻位连接技术定量检测RBP含量的试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗RBP抗体偶联寡聚核苷酸的RBP探针A；

2)抗RBP抗体偶联寡聚核苷酸的RBP探针B；

在上述技术方案中，所述抗RBP抗体为针对RBP不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于邻位连接技术的RBP检测试剂盒。其主要组成包括：

1)RBP探针A；

2)RBP探针B；

3)连接缓冲液；

4)qPCR反应液。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将待测样本加入到反应孔中，再加入RBP探针A和RBP探针B，孵育5-30min后加入到连接缓冲液反应5-30min，最后与qPCR反应液进行混合；

2)对上述1)中的最终反应液进行qPCR，测量计算每个反应孔的Ct值。

此试剂盒的反应孔可以是微孔板、微流控试剂盘、反应杯、反应管等。

附图说明