[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的CEA检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的CEA诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗CEA抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗CEA抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的CEA诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗CEA抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗CEA抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、免清洗、精密度好、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于肿瘤的监测，可以提高肿瘤诊断的准确率，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内CEA的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

癌胚抗原(carcino-embryonic antigen，CEA)是一种存在于结肠癌、正常胚胎肠道、胰腺和肝内的一种蛋白多糖复合物。可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。

CEA最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15％-53％的病人血清CEA也会升高，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。

97％的健康成人血清CEA浓度在2.5ng/mL以下。原发性结肠癌患者CEA增高占45-80％。除原发性结肠癌以外，腺胰癌、胆管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50-70％。

良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20ng/mL，CEA超过20ng/mL时往往提示有消化道肿瘤。所以测定CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。

常用的CEA检测方法主要有酶联免疫吸附试验法、放射性免疫法和磁微粒化学发光法。酶联免疫吸附试验操作时间长，过程需要清洗，步骤较繁琐。放射性免疫法缺点是产生放射性污染，废弃物处理复杂。磁微粒化学发光属于非均相反应，操作过程需要清洗，降低了试剂的精密度。

为解决上述问题，如果能利用CEA的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对肿瘤诊断的CEA快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作快速、灵敏度高、检测快速、精密度高等优点；将其应用于肿瘤的监测，可以提高肿瘤诊断的准确率，则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测CEA的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术CEA检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗CEA抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗CEA抗体偶联荧光蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗CEA抗体为针对CEA不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

在上述方案中，所述抗CEA抗体偶联荧光蛋白N端片段的步骤中，荧光蛋白N端片段与抗CEA抗体的质量比为1∶1-10。

在上述方案中，所述抗CEA抗体偶联荧光蛋白C端片段的步骤中，荧光蛋白C端片段与抗CEA抗体的质量比为1∶1-10。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于双分子荧光互补技术的CEA检测试剂盒。其主要组成包括：

1)抗CEA抗体偶联的荧光蛋白N端片段；