[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的SAA检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的SAA诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗SAA抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗SAA抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的SAA诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗SAA抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗SAA抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、线性范围宽、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于临床病毒和细菌感染的监测，可以提高病毒和细菌感染监测的准确率，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内SAA的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A，SAA)是一种急性时限反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子量约12 000。在急性时限反应中，经IL-1、IL-6和TNF刺激， SAA在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，可升高到最初浓度的100-1000倍，但半衰期极短，只有50分钟左右。SA A与高密度脂蛋白(HDL)有关，它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢。SAA一个特别重要的特性是其降解产物能以淀粉样蛋白A(AA)原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。

与C反应蛋白(CRP)类似，SAA的含量浓度是反映感染性疾病早期炎症的敏感指标，有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗。但是，SAA检测在诊断发生病毒感染、肾移植排斥反应的患者(特别是进行免疫抑制治疗的患者)以及用肾上腺皮质激素治疗的囊性纤维化患者方面，比CRP更确凿。研究发现，在患炎性关节炎的案例中，SAA与疾病活动性的关系最密切。同时检测CRP和SAA能提高对感染的诊断灵敏度。对于SAA淀粉样变性患者，以将SAA水平回复至正常为宗旨的治疗，能改善病情。

目前，检测SAA的方法主要有酶联免疫吸附试验，免疫层析法和化学发光免疫分析法。酶联免疫吸附试验法采用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记抗体，并催化底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但酶联免疫吸附试验法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目；免疫层析法具有操作简单，检测速度快等优点，但也存在灵敏度低，试剂不稳定，重复性较差，难以进行定量的缺点。化学发光免疫分析法具有操作简单，检测速度快、高通量检测等优点，但也存在非均相反应、检测时间长、批内批间变异大的缺点。

为解决上述问题，如果能利用SAA的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发一种针对血栓性疾病诊断和溶栓治疗效果监测的SAA快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、灵敏度高、免清洗、精密度高等优点；将其应用于临床病毒和细菌感染的监测，可以提高病毒和细菌感染监测的准确率，则会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测SAA的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术SAA检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗SAA抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗SAA抗体偶联荧光蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗SAA抗体为针对SAA不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

在上述方案中，所述抗SAA抗体偶联荧光蛋白N端片段的步骤中，荧光蛋白N端片段与抗SAA抗体的质量比为1∶1-10。

在上述方案中，所述抗SAA抗体偶联荧光蛋白C端片段的步骤中，荧光蛋白C端片段与抗SAA抗体的质量比为1∶1-10。