[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的Cys C检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的Cys C诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗Cys C抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗Cys C抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的Cys C诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗Cys C抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗Cys C抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、线性范围宽、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，将其应用于肾脏疾病的监测，可以及时反映肾脏疾病症状，准确反应病情变化，则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内Cys C的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

胱抑素C(cysteine proteinase inhibitor C，Cys C)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ-微量蛋白及γ-微球蛋白，分子量为13.3KD，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液，因此，其血中浓度由肾小球滤过决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物。

研究发现除血清外，尿液中胱抑素C也是反应肾脏损伤的早期指标。传统习惯一般把尿素氮、肌酐作为常规肾功能的检测项目，但因肾脏有强大的储备能力和代偿能力，在肾小球受损早期或轻度受损时，血中尿素氮、肌酐仍可维持在正常水平，只有在严重肾小球损害，一般肾小球滤过率降低50％以下时，血尿素氮、肌酐浓度才明显升高。因此，Cys C是较血清尿素氮、肌酐有更高的敏感性和特异性，对于评价肾小球滤过率有非常重要的价值。研究还发现尿液中的胱抑素C水平与肾功能不全患者肾小管损伤之间存在显著相关性，提示尿 Cys C作为肾小管损伤的一个敏感指标。另外，发现在糖尿病肾病早期，尿Cys C、NAG、β2- 微球蛋白的浓度均升高，尿Cys C显著升高，尿Cys C可作为糖尿病早期肾小管损伤的评价指标。尿液Cys C浓度比血清肌酐、血清Cys C更能反映肾病早期损害的情况，且对肾病的阳性检出率更高。尿胱抑素C相对于α1-微球蛋白和β2-微球蛋白而言，有较高的灵敏度和特异性。因此尿液Cys C的检测对临床实践有重要价值。

Cys C是迄今基本满足理想内源性GFR标志物要求的内源性物质。是新近发展起来的评估肾功能的一种敏感性好、特异性高的指标。可以代替：复杂的全血检测；24小时小便收集；体表面积和肌酐清除率的计算；患者受放射物质的照射。

Cys C的测定方法很多，包括单向免疫扩散法、酶免疫测定法、时间分辨荧光免疫法、放射免疫法、乳胶颗粒增强免疫比浊法等。其中单向免疫扩散法一般用于定性检测；酶免疫测定法操作时间长，且较繁琐，对实验员的要求较高；基于免疫层析的时间分辨荧光免疫法虽然灵敏度较高，但是CV较大，目前尚无解决的可行办法；放射免疫法因为放射污染，逐渐被淘汰；目前较多采用的颗粒增强免疫比浊法，技术已趋于成熟，操作简便，干扰因素少，但液态的胶乳试剂稳定性不佳，检测结果精准性不佳。

为解决上述问题，如果能利用Cys C的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对肾脏疾病诊断的Cys C快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、检测快速、灵敏度高、准确性好等优点；将其应用于肾脏疾病的监测，可以及时反映肾脏疾病症状，准确反应病情变化，则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测Cys C的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术Cys C检测试剂盒的方法，包括如下步骤：