[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的H-FABP检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的H‑FABP诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗H‑FABP抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗H‑FABP抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的H‑FABP诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗H‑FABP抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗H‑FABP抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、线性范围宽、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，应用于早期诊断急性心肌梗死，能够对心肌梗死能做出及时的高度准确的评判，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测H-FABP的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是一种心肌缺血的高敏早期标志物，缺血性发作30 分钟后即可检。脂肪酸结合蛋白(FABPs)在活性脂肪酸代谢的组织中大量存在，如心脏和肝脏，它们的主要功能促进细胞内的长链脂肪酸运输。现已确定九个不同类型的FABP，其中，H-FABP是最广泛的，因为它大量存在于心肌细胞。其低分子量和细胞质的位置相结合，使H-FABP成为急性冠脉综合症(尤其是胸痛发作6小时内)的一个高敏的早期标志物，缺血性发作30分钟后即可检测。这可能是因为在心肌缺血和心肌坏死以后，它迅速从细胞质进入血液循环。H-FABP在6-8小时左右达到浓度峰值，然后在24-30小时左右恢复至正常水平。如此迅速恢复至正常水平得益于高肾清除率，这意味着H-FABP不仅能够用作AMI早期标志物，还是理想的心肌梗死复发诊断标志物。尽管H-FABP的释放特点与肌红蛋白相似，但其心肌特异性是肌红蛋白的15-20倍；因此H-FABP是更有效的心肌损伤标志物。此外， H-FABP的正常血清/血清值比肌红蛋白低，从而降低假阳性比率。

目前，检测H-FABP的方法主要有酶联免疫吸附试验，免疫层析法和化学发光免疫分析法。但这些检测方法均存在一些缺点，酶联免疫吸附试验法的检测灵敏度较低；免疫层析法存在灵敏度低，试剂不稳定，重复性较差，难以进行定量的缺点；化学发光免疫分析法存在非均相反应、检测时间长、批内批间变异大的缺点。

为解决上述问题，如果能利用H-FABP的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对心肌梗死疾病诊断的H-FABP快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、灵敏度高、免清洗、精密度高等优点；将其应用于早期心肌梗死和心肌梗死复发的监测，能做出及时的高度准确的评判，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测H-FABP的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术H-FABP检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗H-FABP抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗H-FABP抗体偶联荧光蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗H-FABP抗体为针对H-FABP不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

在上述方案中，所述抗H-FABP抗体偶联荧光蛋白N端片段的步骤中，荧光蛋白N端片段与抗H-FABP抗体的质量比为1∶1-10。

在上述方案中，所述抗H-FABP抗体偶联荧光蛋白C端片段的步骤中，荧光蛋白C端片段与抗H-FABP抗体的质量比为1∶1-10。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于双分子荧光互补技术的H-FABP检测试剂盒。其主要组成包括：

1)抗H-FABP抗体偶联的荧光蛋白N端片段；

2)抗H-FABP抗体偶联的荧光蛋白C端片段。