[发明专利]一种基于蛋白片段互补技术的PGI检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于蛋白片段互补技术的PGI诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗PGI抗体偶联的酶蛋白N端片段、抗PGI抗体偶联的酶蛋白C端片段和酶的反应底物；本发明还公开了所述一种基于蛋白片段互补技术的PGI诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗PGI抗体偶联的酶蛋白N端片段的制备、抗PGI抗体偶联的酶蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、特异性好、免清洗、精确度高等优点，便于临床检测使用，可预警胃癌发生，对预防胃癌具有相当重要的意义，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种蛋白片段互补技术用于体外免疫诊断检测人体内PGI的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

胃癌是全球的第四大常见癌症，是第二大癌症死因，仅次于肺癌。中国的胃癌发病率已超过日本，并且呈上升趋势。胃癌若能早期诊断，5年生存率一般超过90％，若诊断时已是晚期，5年生存率可能仅为10％-20％。一项回顾性研究证明90％以上的胃癌患者合并有萎缩性胃炎。普遍认为萎缩性胃炎是很重要的癌前病变，在癌症的发病机制中起着至关重要的作用。

胃蛋白酶原是胃液中胃蛋白酶没有消化活性的前体物质，分为胃蛋白酶原I(PGI)和胃蛋白酶原II(PGII)两类，大部分的胃蛋白酶原进入胃腔，只有极少量(约1％)透过毛细血管进入血液，血清中的浓度反映了其分泌水平。其中PGI主要由胃腺的主细胞和黏液颈细胞分泌，PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低。萎缩性胃炎是胃癌的主要癌前病变，当发生萎缩性胃炎时，腺体和主细胞数量减少，引起胃蛋白酶原I分泌下降。由于在浅表性胃炎-胃粘膜糜烂溃疡-萎缩性胃炎-胃癌的发展过程中，均伴随着胃蛋白酶原的变化，胃蛋白酶原不仅成为这三种病变的良好诊断析指标，而且是治疗和预防干预过程中最要的监测指标。

PGI检测试剂盒用于检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原I的含量，具有简便、快速的优势，避免了X-射线对人体的侵害和胃镜的不便。常规的PGI的测定主要采用的是免疫抑制法以及酶联免疫吸附法，免疫抑制法检测迅速、省时，有较高的敏感性，但是影响因素和缺陷众多。酶联免疫吸附法具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但检测灵敏度较低。为解决上述问题，利用蛋白片段互补技术，以PGI的抗体构建技术平台，研发出一种简便、直观、灵敏的PGI快速检测试剂。将其应用于检测胃泌酸腺细胞功能的检测，可提高萎缩性胃炎诊断的准确率，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测PGI的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于蛋白片段互补技术PGI检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗PGI抗体偶联酶蛋白N端片段；

2)抗PGI抗体偶联酶蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗PGI抗体为针对PGI不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

在上述方案中，所述抗PGI抗体偶联酶蛋白N端片段的步骤中，酶蛋白N端片段与抗PGI抗体的质量比为1∶1-10。

在上述方案中，所述抗PGI抗体偶联酶蛋白C端片段的步骤中，酶蛋白C端片段与抗PGI抗体的质量比为1∶1-10。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于蛋白片段互补技术的PGI检测试剂盒。其主要组成包括：

1)抗PGI抗体偶联的酶蛋白N端片段；

2)抗PGI抗体偶联的酶蛋白C端片段。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：