[发明专利]一种邻位连接技术用于定量检测CRP含量的试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种邻位连接技术用于定量检测CRP含量的试剂盒。所述试剂盒包括：CRP探针A、CRP探针B、连接缓冲液、qPCR反应液；本发明还公开了所述的一种邻位连接技术用于定量检测CRP含量试剂盒的制备方法，该方法包括：CRP探针A的制备、CRP探针B的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本明首次将邻位连接技术方法应用在CRP的定量检测上，与现有技术方法相比，具有灵敏性高、特异性强、高通量等优点，可提高细菌感染与非细菌感染的鉴别诊断的准确性，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种邻位连接技术用于体外免疫诊断检测人体内CRP的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是急性时相反应蛋白之一，1930年美国洛克菲勒研究院AVERY实验室的Tillett和Fransic发现急性感染患者的血清能和肺炎双球菌细胞壁上的C多糖发生沉淀反应，后证实参与反应的是一种蛋白质，故称之为C反应蛋白。

血清CRP水平是指示细菌感染的一项敏感而客观的指标。细菌感染时，血清CRP的水平可以中等度至明显升高，阳性率可达90％以上。而病毒等感染时CRP水平多正常或轻度升高，因此可以帮助细菌感染与非细菌感染的鉴别诊断。此外，定量测定脑脊液、胸腔积液中的CRP水平亦可以对脑膜炎、胸膜炎的鉴别诊断有一定意义。不仅如此，CRP水平还与感染范围和感染严重程度有一定关系。

目前检测CRP含量的常用方法包括有酶联免疫吸附试验法和免疫比浊法等。这些方法均存在相应的缺点，酶联免疫吸附试验法的检测灵敏度较低，免疫比浊法存在液态的胶乳试剂稳定性不佳，检测结果精准性不佳。而本发明提出的基于一种邻位连接技术检测CRP含量的免疫诊断检测方法，具有检测灵敏度高、检测特异性强、样品损耗低、操作简单、检测设备常见等优势，将其应用于细菌感染的诊断，可以提高细菌感染与非细菌感染鉴别的准确性，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测CRP的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于邻位连接技术定量检测CRP含量的试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗CRP抗体偶联寡聚核苷酸的CRP探针A；

2)抗CRP抗体偶联寡聚核苷酸的CRP探针B；

在上述技术方案中，所述抗CRP抗体为针对CRP不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于邻位连接技术的CRP检测试剂盒。其主要组成包括：

1)CRP探针A；

2)CRP探针B；

3)连接缓冲液；

4)qPCR反应液。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将待测样本加入到反应孔中，再加入CRP探针A和CRP探针B，孵育5-30min后加入到连接缓冲液反应5-30min，最后与qPCR反应液进行混合；

2)对上述1)中的最终反应液进行qPCR，测量计算每个反应孔的Ct值。

此试剂盒的反应孔可以是微孔板、微流控试剂盘、反应杯、反应管等。

附图说明

图1是本发明实施例提供的一种邻位连接技术用于定量检测CRP含量的试剂盒原理示意图，其中，1-寡聚脱氧核苷酸，2-偶联剂，3-抗CRP抗体，4-待测物(CRP)，5-寡聚脱氧核苷酸，6-偶联剂，7-抗CRP抗体，8-Taqman荧光探针，9-Taq酶。