[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的CK-MB检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的CK‑MB诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗CK‑MB抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗CK‑MB抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的CK‑MB诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗CK‑MB抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗CK‑MB抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、线性范围宽、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，可预警心肌梗死和脑血栓的发生，对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内CK-MB的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

肌酸激酶(CK)是一个与细胞内能量转运，肌肉收缩，ATP的再生有直接关系的重要激酶，是一个二聚体，有3种同工酶的形式存在：2个B单体(CK-BB)，2个M单体(CK-MM)， MB的单体混合体(CK-MB)。CK-MB来源于心肌，心肌中CK-MB占CK总量的15％～25％。所以在心肌损伤，特别是急性心肌梗死(AMI)时，测定CK-MB对AMI的诊断有极大的临床意义。CK-MB是AMI临床诊断起重要作用的一个指标，可以作为不稳定型心绞痛(UA) 的预后判断，临床医生可根据血清CK-MB定量检测结果来判断UA患者的预后情况，方便选择最佳的治疗方案，以期达到最佳的治疗效果。对于缺血性心肌损伤，特别是AMI，为了能了解疾病病情的进程，可利用CK-MB质量升高的程度对该疾病进行危险分层，以方便临床医生利用该危险分层建立合理的治疗方案，减轻患者痛苦和经济负担。

常规的CK-MB的测定主要采用的是免疫抑制法以及酶联免疫吸附法，免疫抑制法检测迅速、省时，有较高的敏感性，但是影响因素和缺陷众多。酶联免疫吸附法具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但检测灵敏度较低。

为解决上述问题，利用双分子荧光互补技术，以CK-MB的抗体构建技术平台，研发出一种简便、直观、灵敏的CK-MB快速检测试剂。将其应用于急性心肌梗死的监测，可提高检测的准确率，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测CK-MB的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术CK-MB检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗CK-MB抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗CK-MB抗体偶联荧光蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗CK-MB抗体为针对CK-MB不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

在上述方案中，所述抗CK-MB抗体偶联荧光蛋白N端片段的步骤中，荧光蛋白N端片段与抗CK-MB抗体的质量比为1∶1-10。

在上述方案中，所述抗CK-MB抗体偶联荧光蛋白C端片段的步骤中，荧光蛋白C端片段与抗CK-MB抗体的质量比为1∶1-10。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于双分子荧光互补技术的CK-MB检测试剂盒。其主要组成包括：

1)抗CK-MB抗体偶联的荧光蛋白N端片段；

2)抗CK-MB抗体偶联的荧光蛋白C端片段。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)在试剂盒的反应孔中加入样品、抗CK-MB抗体偶联的荧光蛋白N端片段和抗CK-MB 抗体偶联的荧光蛋白C端片段，混合反应5-60分钟；

2)激发光照射反应孔，测量每个反应孔发光量获得荧光信号值。