[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的β2-MG检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的β2‑MG诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗β2‑MG抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗β2‑MG抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的β2‑MG诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗β2‑MG抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗β2‑MG抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、线性范围宽、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，将其应用于肾脏疾病的监测，可以及时反映肾脏疾病症状，准确反应病情变化，则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内β2-MG的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

β2-微球蛋白英文缩写为β2-MG或BMG，是Berggard等于1968年首先从肾小管蛋白尿中分离出来的。是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，含100个氨基酸和一个二硫键，因电泳时位于β2区带而得名。β2-MG为细胞膜上完整组织相容性抗原(HLA)的轻链结构，除成熟的细胞和胎盘滋养层细胞外，其他细胞均含有β2-MG，存在于有核细胞的表面。除成熟的细胞和胎盘滋养层细胞外，其他细胞均含有β2-MG，存在于有核细胞的表面。广泛分布于血清、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。由于代谢和HLA的降解，β2-MG分离后，以游离形式存在于细胞外液，包括血清、尿、唾液、脑脊液和胸、腹腔积液中。

正常人血清β2-MG浓度相当恒定，范围是(0.3～3.0mg/L)，β2-MG容易通过肾小球滤膜，但几乎全部由近曲小管以胞饮形式摄取，在局部被代谢降解为氨基酸，正常健康人尿中β2-MG浓度为(0.03～0.37mg/L)正常人β2-MG的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，β2-MG可以从肾小球自由滤过，99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏；故而正常情况下β2-MG的排出是很微量的；而许多疾病，肝炎、肾炎、类风湿关节炎，以及恶性肿瘤、免疫性疾病等，均可使血β2-MG升高。

因β2-MG每天在体内生成率较为恒定，且只被肾脏排泄。它和血清肌酐一样，和GFR之间存在着显著的相关性，因此，测定血β2-MG可作为肾小球滤过率的指标，故最初主要运用于肾功能检查，开始在临床上得以广泛应用，特别是对泌尿系疾病的临床诊断评价具有重要价值。近年来的研究发现，β2-MG的检测对肾脏疾病、恶性肿瘤、糖尿病、高血压及冠心病等的诊断、鉴别诊断及预后估计均有重要参考价值。

血和尿β2-MG的诊断意义有：(1)血β2-MG升高而尿β2-MG正常，主要由于肾小球滤过功能下降，常见于急、慢性肾炎，肾功能衰竭等。(2)血β2-MG正常而尿β2-MG升高主要由于肾小管重吸收功能明显受损，见于先天性近曲小管功能缺陷，范科尼综合征，慢性镉中毒，Wilson病，肾移植排斥反应等。(3)血、尿β2-MG均升高主要由于体内某些部位产生过多或肾小球和肾小管都受到损伤，常见于恶性肿瘤(如原发性肝癌、肺癌、骨髓瘤等)，自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、溶血性贫血)，慢性肝炎，糖尿病肾病等。老年人也可见血、尿β2-MG升高。此外，使用卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素等药也可增高。

目前，常见的诊断β2-MG的方法有快速诊断的胶体金法和荧光免疫法、酶联免疫法(ELISA)、胶乳增强比浊法和磁微粒化学发光法(CMIA)。胶体金法虽然检测速度较快，但是准确性不高，只能用于定性或半定量检测；基于免疫层析的荧光免疫法灵敏度较高，但是CV较大；ELISA法灵敏度不够，且操作时间长，步骤较繁琐。CMIA法较ELISA法虽然操作简单，检测速度快，但由于是非均相反应，操作过程需清洗，检测的可重复性不高。

为解决上述问题，如果能利用β2-MG的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对肾脏疾病诊断的β2-MG快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、检测快速、灵敏度高、准确性好等优点；将其应用于肾脏疾病的监测，可以提高肾脏疾病诊断的准确率。则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。