[发明专利]一种定量测定天麻中总天麻苷元含量的方法

说明书

本发明公开了一种定量测定天麻中总天麻苷元含量的方法，采用多份天麻样品分别在限定方法和环境下进行实验，最后根据实验结果作出标准曲线算法，得出规律性参数对应值，以测定天麻中天麻苷元含量。采用本发明的碱‑酶水解方法水解天麻中的各活性成分得到总天麻苷元，反应条件温和，经济环保；本发明采用高效液相色谱‑荧光检测的手段，与常用的高效液相‑紫外检测方法相比，灵敏度可由μg/mL提高到ng/mL，提高了1000倍；本发明采用总天麻苷元的含量作为天麻质量控制的评价标准，使质控成分更加明确、质量控制更加全面合理，为天麻的质量控制提供依据。

技术领域

本发明涉及天麻医用测定领域，尤其涉及一种定量测定天麻中总天麻苷元含量的方法。

背景技术

天麻又名赤箭、定风草、独摇芝，为兰科天麻属植物天麻(Gastrodia elata Bl.)的干燥块茎。两千年前的《神农本草经》将其列为上品，有平肝息风、通络止痛的功效，有“治风之神药”之称，用于治疗头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫抽搐等症。

天麻的主要化学成分有天麻素、天麻苷元、parishin等。但一直以来中国药典中仅将天麻素的含量作为天麻质量控制的标准。研究表明天麻苷元能透过血脑屏障，具有神经保护作用。刘中秋等指出以天麻苷元为有效成分的透皮凝胶剂能经皮肤吸收进入血液循环，发挥镇静催眠的作用(一种治疗中枢神经系统疾病的天麻苷元透皮凝胶剂，CN201010109013.4)。另外，李艳等人报道天麻苷元具有显著的抑制实验性脑血栓形成及抗炎作用(李艳，昆明医科大学学报， 2015，36(1)：28-31)。因此，2015年《药典》将天麻的质量控制标准由单一的天麻素含量控制扩展成天麻素和天麻苷元两种成分的质量控制。而目前，文献报道天麻中存在大量的parishin类成分，这些成分在体内能代谢成天麻素，现有的文献仅停留在以总天麻素为指标的天麻质量控制。而天麻素在体内能转化成天麻苷元而发挥疗效。

现今，该领域中，对定量测定天麻中总天麻苷元的含量，操作过程亟需一种稳定、灵活的定量测定方法，以测定总天麻苷元的含量，继而控制天麻质量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种定量测定天麻中总天麻苷元含量的方法，有效提高检测天麻中总天麻苷元含量的工作效率，以总天麻苷元的含量来质控天麻质量更全面，更准确。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种定量测定天麻中总天麻苷元含量的方法，包括如下步骤：

1)提取：将各天麻样品编号并磨成粉末，选其中一份并从中称取0.5g样品，加于置有10mL 50％甲醇-水溶液的试管中，用玻璃棒将混合物搅拌混匀，进行超声处理并持续30min；然后再次用玻璃棒搅拌混匀，继续进行超声处理并持续30min；将所得混合物液体倒入10ml的EP管中，进行离心处理，保持 3000rpm的速度处理10min，取离心处理后混合液的上清液，将所取上清液经 0.22μm的微孔滤膜进行滤过处理，得滤液提取物。

2)碱水解：取步骤1)中所得提取物50μL，与50μL NaOH溶液混合，所述NaOH溶液的浓度为0.5-3mol/L,该混合溶液制作3份，并将其分别于 60-80℃环境温度进行水解0.5-2h，其后再用HCl溶液将每份混合溶液分别滴定至中性，所述HCl溶液浓度为0.5-3mol/L。

此水解过程，提取物中包括parishin E,parishin B,parishin C,parishin A，还包括parishin H,parishin L,parishin U,parishin G,parishin M, parishin S,parishin O,parishin T,parishin V,parishin W,parishin R, parishin N,parishinF,parishin I等parishin类化合物水解成天麻素。