[发明专利]一种鸡全血简便快速DNA提取方法

说明书

本发明公开一种鸡全血简便快速DNA提取方法，其提取方法包括将鸡全血加入抗凝剂后，再加入裂解液中混合，于56～60℃水溶锅放置20～30min，加入分离液，于70～80℃水溶锅放置20～30min后离心，取上清液转移到另一EP管中，再加入析出液，离心，留沉淀，加入洗涤液后混匀，离心；小心弃上清，收集沉淀室温干燥，加入TB缓冲液，即得鸡DNA提取液。本发明提取的DNA纯度和DNA完整性都能达到试验要求，浓度和纯度优于现有试剂盒提取的DNA。结合在鸡分子育种方面的应用，可证明该方法是一种成本低，操作简单，环境友好型的DNA提取方法。

技术领域

本发明设计生物检测技术领域，具体涉及一种鸡全血简便快速DNA提取方法。

背景技术

20 世纪 50年代 Watson 和 Crick 提出 DNA 双螺旋模型以来，分子生物学获得空前的发展，动物分子育种在生产中的应用越来越多。基因组DNA的提取在动物分子育种中是一项基础、重要的技术，直接关系到基因检测的效果。目前，有关家禽基因组DNA的提取方法较多，如试剂盒法、盐析法、蛋白酶消化法、有机溶剂提取法等都有研究，但各种方法都存在一定的优、缺点。

酚-氯仿法是提取DNA最为经典的方法，其原理是利用有机溶剂苯酚的蛋白变性，抑制DNase作用，蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，合并含 DNA 的水相，再利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀 DNA。该法在鸡DNA提取上也有应用，研究者利用该法提取迪卡系白壳蛋鸡及褐壳蛋鸡祖代鸡外周抗凝血DNA,已公开的专利：一种提取家禽基因组DNA的方法（CN101768588A）和一种提取禽类全血DNA的方法（CN101748119A），在提取过程使用到有机溶剂Tris饱和酚/氯仿。有机溶剂提取方法的优点是提取的DNA 保持天然状态。该方法提取DNA的缺点是耗时比较长，约在21h；提取过程多次使用对人体有害的氯仿，苯酚等有机试剂，影响研究操作人的工作情绪；操作过程多次加入有机溶剂，步骤繁琐，提取的DNA中可能含有有机试剂，影响进一步的试验研究工作。

盐析法提取DNA的原理是利用蛋白质和核酸在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。研究者用不同禽类品种 (金定鸭、长乐灰鹅、象洞鸡和闽南火鸡)为试验材料，采用 4种不同方法从其全血中提取 DNA，比较不同方法的 DNA 提取效率。结果表明：由于品种之间 DNA 存在差异，DNA 的质量和产率也有显著差异，金定鸭全血 DNA用树脂法效果最佳；长乐灰鹅和闽南火鸡全血 DNA 用酚-氯仿法效果最佳；而盐析法是提取象洞鸡全血DNA的最佳方法。盐析法提取DNA优点，减少了有机溶剂的使用，减少了对环境和试验人员的伤害，缺点是提取DNA纯度差。

吸附法提取DNA是利用核酸的吸附特性来获取组织DNA的方法。该方法的步骤是首先进行细胞的裂解和核酸，蛋白分离（如去污剂SDS, TLS,蛋白酶等），混合液经过吸附材料（树脂，玻璃等材料），核酸被吸附收集，经过特定洗脱液，收集核酸保存。该方法有开发成试剂盒产品，专供提取DNA。如TIANGEN生产的血液基因组DNA提取试剂盒，采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。1 h内即可获得超纯的基因组DNA。该方法的优点，提取的速度快。缺点是成本高，每个样本提取材料成本约3.5元，常在小批量的科研试验研究中使用，大量的检测，如鸡的分子育种过程中，需要成千上万份的检测，成本较大。