[发明专利]一种类肝素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药类，涉及一种类肝素的制备方法。

背景技术

类肝素又称多硫酸化硫酸软骨素(Heparinoid)。1948年，Jorpes和Gardell从肝和肺中制备肝素时，得到一种由D-葡萄糖醛酸和D-葡萄糖胺组成的多糖，这些物质与肝素结构相似，只是硫酸化程度较低，抗凝血活性低，但经多硫酸化后，其性质发生很大变化。通过与血管内皮表面结合，促进了具有抗血栓活性的内源性氨基多糖的释放，可改善局部微循环，增加血流量及血流速度，从而改善中间代谢，促进皮肤营养的供给及废物的排泄，起到消肿去淤、抗炎止痛、促进结缔组织恢复等功效；还能够灭活组胺、5-羟色胺等炎症介质、抑制肉芽组织增生及平滑肌细胞繁殖；在角质软化剂、天然保湿剂的协同作用下，能够抑制胶原纤维的过度增长，减轻瘢痕形成；并能保留皮肤表面水分，使胶原纤维软化，弹性增强，对增生性瘢痕有软化作用。

同时，类肝素抗菌谱广，对许多致病菌如化脓性菌(金黄色葡萄球菌)、肠道菌群(大肠杆菌)、致病性真菌(白色念珠菌)、病毒(脊髓灰质炎病毒)等有良好的抑制作用，能够有效地控制发炎病症，改善患处血液循环，吸收渗液，治愈水肿及浮肿。

发明内容

本发明提供一种能够制备出满足临床需要的类肝素的方法。

一种类肝素的制备方法，其制备工艺如下：以健康动物的骨和/或软骨为原料，将原料粉碎、经氢氧化钠预处理后加入酶进行酶解，经过滤得到清液，加入乙醇沉淀，沉淀物经水溶解后脱色、过滤，滤液经乙醇沉淀后干燥，得到类肝素中间体；中间体经多硫酸化、乙醇沉淀、脱色、分级醇沉、干燥得到精品类肝素。

所述的健康动物的骨和/或软骨，包括但不局限于健康动物的气管、髌骨、各部位的骨骼、软骨。

所述预处理为：先将骨和/或软骨经粉碎后投入反应釜中，加入不少于原料质量1.5倍的水，采用1％-10％的氢氧化钠进行预处理，时间为6-24个小时，温度为10℃-80℃。

所述酶解所用酶包括但不局限于脂肪酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶。

所述酶解条件为酶解条件为上述酶的反应条件及所述酶的灭活条件。例如胰酶反应条件为ph8-10、温度50-60摄氏度、反应时间为2-4小时，灭活条件为85摄氏度以上、不少于15分钟。

所述多硫酸化步骤为：

(1)以N,N-二甲基甲酰胺和/或甲酰胺为溶剂溶解类肝素中间体，溶剂体积：类肝素中间体质量为1-5L/g；

(2)将氯磺酸溶于N,N-二甲基甲酰胺和/或甲酰胺中，氯磺酸和N,N-二甲基甲酰胺和/或甲酰胺体积比为1:1-5倍；

(3)将两种溶液共混于反应釜中，条件为18℃-70℃，时间为4～10小时。

所述脱色的脱色剂为活性炭和/或双氧水；当脱色剂为活性炭时，活性炭加入量为0.1-5％g/L(w/v)、PH值为3-7，反应温度为15℃-100℃、反应时间30～180分钟；当脱色剂为双氧水时，双氧水加入体积为1％-10％(v/v)，温度为15℃-60℃，PH值为8-12，反应时间为2～36小时。

本发明制备的类肝素主要技术指标包括：

性状：白色无臭微苦粉末；

PH：5.3-7.6；

旋光度为：-11.7°——-14.7°；

特性黏数0.09——0.18；

游离硫酸基13.0％以下；

D-葡萄糖醛酸19.0——24.0％；

氮1.6——2.0％；

有机硫酸基25.8——37.3％；

高热残存38.0——48.0％；

抗凝血活性：80IU以下；

透明质酸酶阻碍活性14％-26％。

本发明提供一种能够制备出满足临床需要的类肝素的方法，具有生产工艺简单，原料来源广、价格低廉，无废弃物排放，符合环境保护要求，符合循环利用的要求。

具体实施方式

实施例1