[发明专利]一种拟穴青蟹产地的鉴别方法

说明书

本发明公开了基于代谢组学研究手段进行拟穴青蟹产地识别的方法，属于拟穴青蟹产地鉴别技术领域，本发明的主要步骤在于先选择若干个不同产地的拟穴青蟹，对拟穴青蟹肌肉的水相提取物中的小分子代谢物组成进行分析，然后采用OPLS‑DA对¹H NMR数据进行多变量统计分析，建立OPLS‑DA模型获得不同产地的拟穴青蟹的特征性代谢物，利用特征性代谢物区分不同产地的拟穴青蟹，与现有技术相比，本发明具有如下优点：本发明通过核磁共振氢谱法测定不同产地拟穴青蟹总提取物中小分子物质的变化进行分析，从而对拟穴青蟹产地进行识别，为拟穴青蟹溯源提供了一条新途径。

技术领域

本发明涉及基于代谢组学研究手段进行拟穴青蟹产地识别的方法，属于拟穴青蟹产地鉴别技术领域。

背景技术

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国东南沿海主要的青蟹品种，自然分布在江苏省到海南省之间。不同地域来源的青蟹有着不同的口感和质量。因此，许多消费者通常根据青蟹的产地来判断蟹的质量，特殊产地的青蟹也就有了更高的商品价值。一般而来，消费者根据青蟹的色泽和大小来鉴别其产地，通常从南到北，青蟹的个体逐渐变小，而甲壳颜色逐渐变浅。但这种方法带有主观性，而且青蟹的大小和甲壳的色泽受到多种因素的影响，实际上很难对拟穴青蟹的产地进行准确鉴别。Overton等(1997)曾测定了不同产地的5种锯缘青蟹(S.serrata)的22种形态特征指标，但这些指标并不能把这5种锯缘青蟹全部区分开。因此，青蟹的形态特征并不能有效地鉴别锯缘青蟹的产地。尽管分子生物学方法能可靠地把青蟹属分为4个种：S.serrata、S.paramamosain、S.olivacea和S. tranquebarica，但同一种内的青蟹具有几乎完全一样的遗传背景，因此，分子生物学方法也不适用于不同产地拟穴青蟹的鉴别。

因此，有必要开发一些检测方法精确简便，且能反映出不同产地拟穴青蟹的具体差异的方法，以便为拟穴青蟹产地识别提供一条新途径。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种基于NMR的代谢组学研究手段对不同产地的拟穴青蟹进行分类识别的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该拟穴青蟹产地的鉴别方法，其特征在于：所述方法是先选择若干个不同产地的拟穴青蟹，对拟穴青蟹肌肉的水相提取物中的小分子代谢物组成进行分析，然后采用OPLS-DA对¹H NMR数据进行多变量统计分析，建立OPLS-DA模型获得不同产地的拟穴青蟹的特征性代谢物；当需要检测某一来自上述产地的未知拟穴青蟹时，能够采用方案A或者方案B获知其产地信息：

其中方案A具体是：先对这一未知拟穴青蟹的水相提取物中的小分子代谢物的种类进行检测并计算相对含量，然后将数据导入OPLS-DA模型中，即可获得这一未知拟穴青蟹的产地信息；

方案B具体是：检测一个以上的特征性代谢物在这一未知拟穴青蟹中的存在情况，根据特征性代谢物的存在情况获知产地信息。

进一步地，建立所述OPLS-DA模型以获得不同产地的拟穴青蟹的特征性代谢物，具体是将OPLS-DA模型中一维¹H-NMR的权重值|r|大于0.666的主成分进行ANOVA检验，结合P值判断差异表达代谢物，p<0.05为差异有统计学意义，获得若干个差异代谢物。

其中，所述产地选自慈溪、三门、霞浦和钦州。

具体地，所述鉴别方法包括如下步骤：

(1)待检测拟穴青蟹的预处理

将分别获取不同产地的待检测拟穴青蟹样品，清洗后，获取不同产地的拟穴青蟹游泳足的肌肉；

(2)破碎

分别称取不同产地的待检测拟穴青蟹肌肉样品加入冷甲醇水溶液进行细胞破碎；

(3)离心